Средства против мышей: Средства от крыс и мышей купить с доставкой в гипермаркете Чистый Мир.

Содержание

Эффективные средства от мышей на даче — Рамблер/новости

Можете со мной поспорить, но, перебрав множество средств и методов борьбы с мышами, реально действенных и эффективных я нашла всего два: кот и отпугиватель. Впрочем, обо всем по порядку…

Как бороться с мышами на даче

Кто нам угрожает

Урожай оказывается под угрозой и на грядке, и в хранилище, если на даче водятся мыши, землеройки и прочая живность, охочая до плодов нашего труда. Врага надо знать в лицо, поэтому давайте знакомиться…

Встречается везде, за исключением, разве что, Антарктиды, Крайнего Севера и высокогорий — там для нее с пропитанием проблемы. Еще не любит этот зверек низких температур и высокой влажности, но сильно страдает также от засухи. И пусть вас не вводит в заблуждение слово «домовая» в названии — обитает она не обязательно в наших жилищах. Зачастую такие мышки мигрируют в зависимости от сезона: потеплело — ушли «на вольные хлеба»; похолодало — подтянулись поближе к человеку. Поэтому и пакостят они нам как в саду-огороде, так и в подвалах, погребах, кладовых и прочих хранилищах припасов.

Мышь домовая, фото из Википедии

Размножаются мыши чрезвычайно активно: одна особь женского пола в год способна принести потомство (от 3 до 12 мышат) 5-10 раз, а в благоприятных условиях — и больше (до 14). Соответственно, и бороться с ними не так-то просто — на место одной отловленной приходит сразу несколько новых «бойцов». В природе предпочитают питаться семенами различных растений, не брезгует мелкими насекомыми и их личинками. Ну а в человеческом жилище становится всеядной — в ее рацион могут войти даже мыло, свечи и прочие подобные малосъедобные (в нашем понимании) предметы. В общем, что не съест, то попортит… А еще — как большинство грызунов — разносит всяческую заразу, так что близкое соседство с мышами не только для урожая, но и для здоровья весьма вредно.

Эти грызуны относятся к семейству хомяковых, а не мышиных и являются дальними родственниками ондатр и леммингов. Нам от этого, впрочем, ничуть не легче. Включает подсемейство Полевковые ни много ни мало — 143 вида, среди которых есть и подземные, и водные обитатели. Дачникам досаждает чаще всего обыкновенная полевка, обитающая в лесных, лесостепных и степных регионах на колоссальной территории — от Финляндии до Казахстана и Монголии.

Размножается не так шустро, как домовая мышь, преимущественно в теплое время года. Живет всего лишь 4,5 месяца, но за этот срок успевает причинить нам немалый ущерб, поскольку аппетитом отличается неплохим, да еще и запасы делать любит. А провиантом этому зверьку служат и семена растений, и их побеги; не откажутся они от сочных луковиц, мясистых клубней и питательных корней; зимой охотно обгрызают кору деревьев и кустарников. Так что и в плодовом саду, и в цветниках, и на огороде от полевки вреда немало.

Внешне землеройки очень похожи на мышей, но отличаются от них вытянутой мордочкой, напоминающей хоботок. Семейство Землеройковые включает около 350 видов, из которых на территории нашей страны обитает порядка 25.

Вообще-то, землеройки (бурозубки, белозубки и прочие) считаются животными полезными, так как основная их пища — насекомые и личинки, в том числе, сельскохозяйственные вредители. Но мало кому из садоводов-огородников такое соседство симпатично: эти зверушки, несмотря на скромные размеры, могут перепахать участок и загубить немало растений, корни которых просто повисают в воздухе. Так что, пытаясь соотнести пользу и вред землероек, большинство из нас склоняется к тому, что второго все же больше. Радует, что размножаются эти представители фауны довольно умеренно и растительную пищу употребляют лишь в крайних случаях. Но все же гораздо приятнее, если живут они не на вашей даче, а где-нибудь по соседству. Есть еще крысы и кроты, но их мы сегодня оставим за рамками обсуждения. Про то, как избавиться от кротов, разговор уже был, ну а крысы, к счастью, на дачах все же довольно редки (хотя городские жители часто от них страдают).

Как с этим бороться

Методов и средств борьбы с мышами и прочими грызунами человек изобрел множество. Мы уже обсуждали самые гуманные из них — те, что позволяют отпугнуть живность или просто изловить, не причиняя ей ущерба. Но увы! Приходится признать: многие из этих вариантов работают плохо. То ли мышь нынче умная пошла, то ли методы постепенно устаревают… Какие еще способы есть у нас в арсенале?

Я использовала отравленные приманки — и гранулы, и зерна; всевозможных видов, разных производителей. Что могу сказать… Возможно, мыши от ядов погибают. Не исключено, что без использования отравы численность их была бы значительно большей (как и причиненный ущерб) — сравнить не с чем. Но всякий раз, извлекая из подвала попорченные грызунами яблоки и картошку либо обнаруживая очередной запас отравленного зерна, которое злодеи припрятали «на черный день», я мечтала отыскать нечто более эффективное.

Отравленная мышь — малоприятное зрелище

Мышей, погибших от предложенного угощения, мне не попадалось. Похоже, они с аппетитом закусывали яд моими припасами, а если и погибали, то от обжорства. Так что отнести этот способ к действенным и эффективным я все же не могу. Не стоит забывать и о возможных «побочных эффектах»: ядом, предназначенным для грызунов, могут отравиться домашние питомцы, и любая небрежность в обращении с ним чревата серьезными неприятностями.

Говорят, помогает… Но по мне — слишком много у этого способа издержек. Во-первых, пойманного зверька нужно из мышеловки извлечь. Для кого-то, может, и не проблема — но есть впечатлительные товарищи (вроде меня, например)… Во-вторых, если грызунов много, то сколько же нужно мышеловок??

В-третьих, многие из тех, кто пользовался подобными приспособлениями, подтверждают: не всякая конструкция удачна, не на любую приманку мышь ловится, и вообще — животные эти довольно умны, а потому очень быстро учатся избегать опасности. Тогда эффективность метода оказывается тоже под большим вопросом…

Вот этот способ мне пришелся по вкусу. С одной стороны, он достаточно гуманный: приборы не губят зверьков, а лишь действуют им на нервы)) Правда, настолько сильно действуют, что грызуны предпочитают покинуть негостеприимный дом, — ну так я не до такой степени люблю животных, чтобы беспокоиться о нервной системе мышей и их пропитании.

Как прогнать мышей?

С другой стороны, работает эта техника, фактически, без всякого участия человека: воткнул вилку в розетку, установил отпугиватель там, где нужно, — и забыл о проблеме. Ни убирать погибших вредителей, ни добавлять отраву — ничего не нужно. Наконец, — и это, пожалуй, важнее прочих обстоятельств, — оно реально работает! Я испытываю отпугиватель Экоснайпер первый сезон, но впечатления уже очень хорошие. Почти два месяца ни одна мышь не приближается к моим припасам. В прошлом году в эту пору они уже с большим аппетитом поглощали яблочки в подвале и заедали их капустой. В этом — ни одного следа по сей день не обнаружено. Производители сегодня предлагают устройства с различным «радиусом действия», они существенно отличаются друг от друга как по цене, так и по эффективности. Важно: есть модели для помещений (к ним как раз принадлежит Экоснайпер) и для использования в саду, на огороде, в теплице. Отпугиватели заслуживают отдельного разговора, потому что нюансов их выбора и использования немало. Думаю, мы еще вернемся к ним, а пока предлагаю посмотреть полезный видеосюжет об использовании этих устройств на даче

Я довольно долго присматривалась к подобной технике — изучала отзывы, мнения. Не стану утверждать, что все приборы одинаково эффективны — мне пока сравнивать не с чем. Но Экоснайпер — работает, и это факт. Убедили отзывы других дачников, которым этот отпугиватель помог избавиться не только от грызунов, но и от муравьев в доме (кстати, я его тоже сперва именно на муравьях испытывала). Теперь и сама подтверждаю: полезная штука, действенная.

Хороший кот — универсальное средство от мелких грызунов на даче. Ловит, разоряет гнезда — и зверушки довольно быстро уходят с насиженных мест, не желая рисковать потомством. Не зря же в деревнях в каждом доме был кот или кошка, да не один порой. Но справедливости ради следует сказать: у этого способа борьбы с мышами есть свои недостатки.

Не всякий кот знает, что мышей нужно ловить

Во-первых, не каждый «современный» кот сохранил инстинкты диких предков. Некоторые мои знакомые, хозяева упитанных и холеных котиков, сами говорят: «Нашему покажи мышь — неизвестно, кто больше напугается. Он и не знает, как их ловить, обленился совсем». От такого животного, конечно, проку будет мало. Во-вторых, средство это сезонное: домашних питомцев на дачу привозят, как правило, только в теплое время года, а зимой участок и садовый домик поступают в полное и безраздельное пользование мышей. В-третьих, даже если вы живете в своем доме круглый год, есть места, куда кот свободного доступа не имеет, а грызуны проникают запросто — те же погреба, например. Конечно, можно запереть там четвероногого охотника на некоторое время, но как-то это не слишком гуманно. А свободный вход-выход в хранилище может нарушить температурный режим, да и просто не всегда удобен хозяевам. С другой стороны, численность мышей, землероек и прочих подобных вредителей на даче, где есть кот, заметно уменьшается, и это подтверждают все, кто имел возможность сравнивать. Кстати, некоторые собаки (преимущественно некрупных охотничьих пород) тоже с успехом ловят дачных грызунов. Словом, хоть природа и позаботилась о том, чтобы мыши никогда не переводились в наших домах и на садовых участках, противостоять их натиску нам вполне по силам, я убедилась. А вы? Как боретесь с грызунами на даче? Какие методы, средства, способы считаете самыми эффективными и действенными?

Средства от крыс и мышей

Самые популярные и удобные в применении способы борьбы с грызунами – яды, ультразвуковые отпугиватели, клеевые и механические ловушки. Мы подготовили для вас краткий обзор эффективных средств от мышей и крыс, многократно проверенных при дератизации частных домов и квартир.

«Бромадиолон»

«Бромадиолон» – российский родентицидный препарат с одноименным действующим веществом. Выпускается в виде прозрачной тягучей жидкости красного цвета для изготовления пищевых приманок. При попадании в организм отрава для крыс на основе бромадиолона вызывает необратимые нарушения свертываемости крови. Содержит горькие компоненты, предохраняющие от отравления домашних животных. От момента поедания приманки до гибели грызунов проходит от 4 до 14 дней. Препарат относится к III классу умеренно-опасных веществ.

«Цунами»

«Цунами» – готовое средство от крыс в частном доме в виде гранулированных приманок, купить которые рекомендуем для бытовой и медицинской дератизации замкнутых помещений и открытых площадок. Действующим веществом служит бродифакум, принадлежащий к IV классу малоопасных веществ. Формула содержит пищевые аттрактанты, повышающие эффективность препарата даже при наличии альтернативной пищи, и битрекс – горький компонент, отталкивающий домашних животных. От момента поедания до гибели грызунов проходит 4-10 суток. Расход средства – до 30 г для мышей, до 100 г для крыс.

Chiston 2

«Чистон-2» – ультразвуковой прибор, очищающий от грызунов территории до 300-500 кв. м. Изготовлен по ГОСТ 15150-69. Рекомендуется для нежилых помещений, в 60% случаев может вызывать дискомфорт у человека. Хотя использовать это средство от мышей в квартире совершенно безопасно, оптимальный вариант – включать прибор периодически, в отсутствие людей. Chiston 2 генерирует мощные ультразвуковые импульсы частотой 20-70 кГц с круговым воздействием, что приводит к быстрому освобождению помещений и прилегающих территорий от грызунов-вредителей. Эффект действия связан с выработкой стойкого тревожного рефлекса с последующим избеганием зоны действия прибора.

«Форссайт клей»

Клеевые ловушки – эффективное средство от крыс, купить которое следует как можно раньше, при единичных случаях появления грызунов. «Форссайт» представляет собой длительно не высыхающее бесцветное клейкое вещество на основе полиизобутилена и бутадиена, предназначенное для изготовления ловушек на гладких подложках.

Клей для ловли мышей и крыс нетоксичен, не содержит ядов, безопасен для человека и животных, выпускается в удобных тубах и в виде готовых ловушек. Подходит для применения в жилых помещениях, медицинских и детских организациях, на продовольственных складах. Для уменьшения расхода клея от крыс рекомендуем сначала нагреть его на водяной бане до 60 градусов. Расход клея на каждую подложку – 25 г.

Еще одно удобное средство от мышей и крыс в квартире – «Преграда» с сильно фиксирующим клеем постоянной липкости, позволяющим ловить даже самых крупных крыс. Выпускается в виде готовых ловушек «Домик». Клеевое вещество содержит аттрактант для привлечения грызунов. Для повышения действенности клея от мышей можно в центр положить приманку и по возможности закрыть все доступы к пищевым запасам. На 20 кв. м. потребуется 4 клеевых ловушки, которые необходимо установить под раковинами, по бокам холодильника, в кладовках.

Мышеловка

Хорошо известное пружинное приспособление для механического отлова мышей и мелких крыс в виде капкана с приманкой. Как только мышь прикасается к пусковому механизму, срабатывает пружинный рычаг. В качестве приманки используют шоколад, сыр, орехи, арахисовое масло, хлеб. В качестве средства от крыс можно купить крысоловку с более прочной, мощной механикой и дополнительными зубьями.

В нашем магазине вы приобретаете сертифицированные средства от крыс и мышей, разрешенные для использования в квартирах и частных домах.

О наличии в магазине препаратов предварительно узнавайте по телефонам +7(8422)455-288, +7(8422)455-292.

Что выбрать. Обзор средств от крыс и мышей

 

При обнаружении в доме, квартире или на производстве грызунов, люди, естественно, сразу решают с ними бороться. Ведь крысы и мыши опасны, они портят имущество и разрушают строения. В помещении появляются следы их жизнедеятельности и неприятный запах. К тому же крысы и мыши являются переносчиками опасных инфекций и болезней, паразитов.

Средств для уничтожения мышей и крыс множество, и у обычного человека возникают объективные сомнения – что лучше поможет от грызунов?. Разберемся более подробно в этом вопросе.

Методы уничтожения мышей и крыс

Существует множество способов избавления жилых и производственных помещений от вредителей. Что выбрать – подскажут наши рекомендации. Методов эффективного уничтожения мышей и крыс несколько:

  • механический;
  • физический;
  • химический;
  • биологический.

СЭС Биотрикс использует самые эффективные методы дератизации. Убедиться в этом можно не только в Москве, но и в Калуге, Обнинске, Пушкино. Для этого следует обратиться в компанию по указанным телефонам. А пока рассмотрим каждый метод более подробно.

Механические приспособления для ловли грызунов

Механический метод подразумевает ловлю мышей с помощью клеевых ловушек, туннелей и мышеловок. Учтите, что такой способ подходит, если в помещении есть небольшое заражение грызунами. Больше всего ловушки эффективны против мышей. Крысы – более умные животные, и, если одна особь попадется, другие близко не подойдут к приспособлению для отлова.

Механический способ обладает своими особенностями. Например, если вы будете использовать клеевые ловушки от мышей или туннели, будьте готовы к тому, что пойманные зверьки будут живы, и с ними нужно будет что-то делать.

В обычной мышеловке стоит массивная пружина, благодаря действию которой животное, попавшись, сразу погибает.

Но существует вероятность повреждения конечностей у детей и домашних животных. Поэтому мышеловки нужно ставить в укромных местах, где до них не доберутся любопытные домочадцы. Этот метод – наиболее распространенный и безопасный среди населения, но эффективность его мала.

Физические методы

Где купить ультразвуковую ловушку от мышей может подсказать сосед, но вот о ее эффективности ходят легенды. На самом деле только дорогие качественные устройства обладают достаточной мощностью для отпугивания грызунов. Такой метод борьбы с мышами и крысами считается больше превентивный, нежели истребляющий.

Устройство должно постоянно менять частоту звука, иначе крысы приспособятся к нему, и не будут воспринимать его как угрозу. Домашние животные (кошки, хомяки, собаки) тоже слышат ультразвук, производимый устройством, они могут меняться в поведении, быть раздражительными, испуганными. Прибор должен постоянно работать, быть включенным в сеть.

Отзывы о ультразвуковом приборе для отпугивания мышей противоречивы. Кто-то говорит, что он помогает, другие же пользователи критикуют и подвергают сомнениям эффективность устройства.

Биологические методы уничтожения грызунов

Данный способ истребления вредителей заключается в использовании природных врагов грызунов. Таковыми являются коты, хорьки, ласки, лисы, совы. Они эффективно уничтожают большие популяции грызунов, однако такой способ не применим в условиях детских учреждений, комбинатов питания, кафе и ресторанов. Да и не гуманно заводить кота только для травли мышей. Конечно, если у вас частный дом или дача, то вы обязаны быть владельцем хорошего кота-крысолова, который станет не только грозным защитником, но и любимцем семьи.

Химические методы

Широко применим службами дезинсекции в городах Серпухово, Сергиев Посад и других населенных пунктах химический способ травли мышей, который имеет две разновидности.

  • Раскладной. Приманка отравлена, раскладывается у стен, углов, и в укромных местах по всему периметру помещения и близлежащих территории.
  • Аэрация. Газация герметично закрытых помещений, объектов с помощью родентицидов. Делается это только профессиональными дезинсекторами с помощью специального оборудования – генераторов холодного и горячего тумана.

Последний способ применим для больших ангаров, складов, трюмов кораблей. Основное требование – герметичное, закрывающееся помещение. Яд попадает в дыхательные пути животных и наступает их смерть.

Раскладной метод уничтожения мышей более широко известен потребителям, ведь в различных населенных пунктах, будь то Владимирское, Обнинск или Воскресенск, случаются нашествия крыс или мышей на жилые и производственные помещения.

Отрава от крыс и мышей эффективно действует, попадая в желудочно-кишечный тракт животного. В зависимости от состава ядов существует определенная их классификация.

  • Антикоагулянты. Специальные вещества, способные разжижать кровь животного. Они медленно накапливаются в организме и имеют эффективное воздействие. Крысы отличаются умом, изначально приманку они лишь слегка попробуют. Не отметив у себя никакого негативного эффекта, в следующий раз отравленную приманку они съедят полностью. В крови накопится достаточное количество антикоагулянта, начнутся обширные внутренние кровотечения, и животное умрет. Примерами таких препаратов является Зоокумарин, Гельцин, Ратидион.
  • Фосфаты. Особые вещества на фосфатной структуре. В желудке животного под воздействием соляной кислоты превращаются в опасные соединения фосфора. Смерть от съедания такой приманки очень быстрая, и существует вероятность, что другие особи снадобье уже не попробуют из осторожности.
  • Крысид, мышьяк, стрихнин. Данные яды действуют медленно, и официально запрещены для использования как в жилых помещениях, так и на производствах.

Существуют препараты с мумифицирующим эффектом и без него. В первом случае мышь или крыса.ю съевшая отраву, умирает, но не разлагается. Она просто засыхает. Это несомненный плюс, если вы будете использовать средство от крыс в частном доме или квартире. Ведь зверек, съев приманку, полезет в укромное место – под пол, в стены, шахту вентиляции. Умерев, неприятного запаха он издавать не будет.

Согласно отзывам о средствах для уничтожения грызунов, не все производители правдиво указывают состав и должный эффект препаратов. Иногда средство не действует вовсе, а стоит очень дорого. Если у вас завелись крысы или мыши, обращайтесь в проверенную временем и сотнями клиентов СЭС Биотрикс. Квалифицированные сотрудники подберут для вас метод дератизации, родентицид, и проведут обработку. Стоимость профессиональной дератизации доступна каждому. Обращайтесь к нам по указанным на сайте телефонам или заполните заявку онлайн.

  • < Назад
  • Вперёд >

средства и способы как избавиться от грызунов навсегда

Как избавиться от мышей: средства и способы как избавиться от грызунов навсегда. Из всего множества видов грызунов мыши предпочитают плодиться и размножаться в «комфортных» условиях существования: в теплое время года в огородах и садах, а на зиму перебираются в кладовые и подвалы где сохраняется урожай, а также могут забраться непосредственно в жилище к человеку.

 

 Признаки присутствия мышей


Обычно в дневное время мыши прячутся в щелях и норах из-за своей пугливости, и начинают свой «промысел» ночью. Живущих в доме непрошенных гостей выдает неприятный запах, особенно в тех помещениях, которые редко проветриваются. Когда рядом с продуктами появляются мышиные экскременты, замечаются следы зубов грызунов на фруктах или овощах – это явный признак того, что мыши активно плодятся, и их популяция растет. Вольготно живущие мыши, осмелев могут начать пакостить в дневное время в присутствии домочадцев.

Для роста популяции мышей  благоприятны следующие условия:

  • Свободный доступ к продуктам питания;
  • Наличие затемненных укромных мест с плюсовой температурой круглый год;
  • Ветхие, нежилые помещения или заброшенные коммуникации рядом с жильем человека.

Мыши – зверек чрезвычайно плодовитый. Одна взрослая самка способна в течение года принести потомство от 5 до 10 раз в каждый из которых не менее 3 мышат. Причем в зависимости от благоприятности условий число детенышей в один помет может достигать 10-14 особей.  Это с виду безобидное животное способно нанести серьезный ущерб: от порчи продуктов и вещей, до заражения людей грозными инфекционными заболеваниями. Поэтому необходимо систематически проводить комплексы мероприятий по защите от вредителя по всем направлениям: в огородах и садах, подвалах и кладовых, а также на дачах и в домах.

 

В комплекс защитных мер от мышей включатся:

  • Профилактика;
  • Химическая защита;
  • Физическое воздействие;
  • Отпугивание;
  • Народные средства.

Профилактические меры в борьбе с вредителями на участке


Живущие в естественной среде полевые и домовые мыши роют в земле разветвленную систему ходов и нор к людским огородным участкам, где есть чем прокормиться. В саду и огороде препятствием от мышиного нашествия по весне и осени будет прокопка участка по периметру и между грядками, в результате которой нарушаются эти мышиные коммуникации. Мышь пугают такие разрушения. И чем масштабнее и чаще будут проводится такие профилактические прокопки, они помогут остановить наступление опасных вредителей и уберечь урожай на корню вплоть до уборки.

Мышей можно попытаться отпугивать кошачьим запахом. В этих целях нужно в ведре воды в любой концентрации разводить содержимое кошачьего туалета. Этим раствором поливать грядки. Можно использованный наполнитель туалета вкапывать в междурядье. Метод будет действовать пока мыши не перестанут бояться кошачьего запаха.

Мыши не уважают вкус золы. Для сохранности урожая корнеплодов можно посыпать ботву зреющей моркови, свеклы, сельдерея золой. На вкусовых качествах овощей    это не скажется, а мышей отпугнет. Просыпание золой картофельных клубней и корнеплодов пред закладкой на хранение в погреб также отпугивает мышей.

Профилактические меры в борьбе с мышами в помещениях


Мыши отличаются всеядностью, поэтому помещения где есть пища в достатке их привлекают. Попав через щели или небольшие отверстия в жилище к человеку животные находят уютное и теплое местечко обустройства гнезда, где в круглогодичном цикле размножаются. Для строительства гнезда мелкие грызуну используют любой материал.

Меры профилактики появления мышей на даче, в доме, подвалах и кладовых помещениях состоят в создании условий, препятствующих их проникновению в помещение:

  • Рекомендуется при строительстве дачных построек и домов для внутри стенового утепления использовать такие материалы как стекловата, базальтовая стружка и другие неподходящие мышам для рытья проходов в помещение;
  • Все вентиляционные отверстия помещения необходимо оборудовать металлическими решетками, препятствующими проникновению нежелательных гостей;
  • Замеченные щели и отверстия в плинтусах и стенах следует ликвидировать при помощи не подходящих для зубов грызуна материалов заделки/замазки;
  • Можно по периметру фундамента дома рассыпать золу (ширина слоя 10-15 см). Зола в желудке мышей вызывает раздражение, и поэтому станет преградой при попытке проникнуть в дом.
  • Все запасы продуктов в доме необходимо хранить в герметичных закрытых емкостях;
  • Важно содержать в чистоте хозяйственные помещения, периодически проводить их дератизацию.
  • Постоянно контролировать санитарное состояние внутреннего двора, подвалов и хранилищ, не допуская скопления мусора.

Химические препараты от грызунов


Помочь в борьбе с мышиным нашествием призваны специальные химикаты, которые выпускаются на промышленном производстве. По своему воздействию на организм грызуна препараты подразделяются на химикаты быстрого и пролонгированного действия. В первом случае мышь съев приманку с ядом, погибает в течение нескольких часов. Препараты пролонгированного действия способны накапливаться в организме вредителя, постепенно отравляя, приводят животное к гибели.

Промышленные ядохимикаты выпускаются в различных форм-факторах:

  • Порошковые субстанции;
  • Гели и пасты;
  • Клеевые субстанции;
  • Жидкие растворы.

Применять яды от грызунов нужно предельно осторожно, поскольку они небезопасны для здоровья домочадцев и домашних животных. Перед применением приманок с ядами следует внимательно ознакомиться с инструкциями производителя и тщательно их соблюдать.

Достаточно эффективные химические препараты от мышей для личных подсобных хозяйств это:

  • Субстанции на основе действующего вещества бромадиолона (раттидион, бром-паста, зерноцин НЕО и другие;
  • Субстанции на основе действующего вещества бродифакум (бродират, килмайс, морторат и другие).

Для использования в нежилых помещениях подойдут такие препараты как родефакум, эфа-шокк, щелкунчик.

Для жилых помещений можно использовать препарат барьер на основе действующего вещества этилифенацина.

Физические меры борьбы с расплодившимися мышами


К физическим мерам уничтожения пробравшихся в жилища и закрома мелких грызунов относятся мышеловки различных конструкций промышленного или кустарного изготовления и клеевые ловушки. Мышь заманивается в устройство запахом пищевой приманки, задевая пусковой механизм мышеловки она в зависимости от конструктивных особенностей ловушки оказывается убитой, покалеченной, замкнутой в ограниченном пространстве, или приклеенной к картонке.

Можно завести на участке кошку, умеющую ловить мышей. К сожалению далеко не все представители этих домашних животных сохранили инстинкт диких предков.

Физические методы уничтожения мышей малоприятны и негуманны, ведь зверьки убиваются или калечатся. Пойманных мышей нужно вытаскивать из ловушки и выбрасывать. К тому же если много развелось мышей, устройств нужно несколько на одной мышеловкой их ловить – не переловить. Да и зверьки не лыком шиты, не на всякую приманку ведутся и быстро обучаются избегать опасность.

Методы отпугивания мелких грызунов


  1. Растения — репелленты. Отпугивать мышей могут запахи некоторых растений, так называемых репеллентов. Мелких грызунов отпугивают ароматы бузины черной, красной и травянистой. Рядом с компостными ямами и хранилищами рекомендуется высаживать у. Там, где растет это растение мыши не селятся. Также ветки бузины можно разложить под укрывным материалом на грядках с луковичными посадками в зиму, чтобы уберечь от повреждений мышами. Не нравится мелким грызунам запах ромашки аптечной. К отпугивающим мышей своим запахом относятся и такие растения как багульник, чернокорник лекарственный, называемый в народе мышиным ядом, пижма, мята, полынь, а также огородные культуры кориандр, чеснок, томаты. Среди растений есть представители — так называемые ратициды, выделяющие ядовитые для мышиного рода вещества. Из них можно приготовить отравленные приманки, которые могут помочь избавиться от назойливых огородных вредителей.
  2. Использование химических веществ для отпугивания мышей.Мышей можно отпугивать запахами некоторых химических веществ. В нежилых помещениях где нет продуктов все укромные места можно обработать формалином или керосином. Вблизи построек для домашней птицы и скота, овоще и зерно хранилищ можно насыпать нафталиновые опилки. Ими же можно присыпать мышиные норы в огородах и садах. Не выносят мелкие грызуны запахи бензина и скипидара. Можно смоченными этими жидкостями тряпки подсовывать в щели и норы.
  3. Использование ультразвуковых устройств отпугивания. Не так давно производители стали поставлять на рынок электромагнитные отпугиватели непрошенных в дом гостей. Эти приборы действуют на нервную систему животных, заставляя их ретироваться из негостеприимных стен помещения. Принцип действия этих приборов основан на генерировании разно — частотных ультразвуковых колебаний. Ухо человека эти колебания не воспринимает, а мыши их ощущают и чувствуют дискомфорт. Работают эти устройства в зависимости от конструкции от бытовой сети или на батарейках.

Преимущества ультразвуковых отпугивающих приборов


  • Подходят для использования не только в жилых помещениях, но и подвалах и кладовых, а также теплицах;
  • Простота эксплуатации;
  • Эргономично продуманный дизайн;
  • Возможность работы прибора при перепадах температуры от -25 °C до +30 °C;
  • Негативное влияние на людей и домашних животных отсутствует.

Эффективность работы приборов зависит от мощности и радиуса действия. Хорошо, судя по отзывам, зарекомендовали себя такие модели как Торнадо-300, Град-А500, Пест Реджект.

Народные хитрости борьбы с мелкими грызунами


Когда применять ядохимикаты в борьбе с мышами небезопасно: присутствие в доме маленьких детей, домашних животных, можно воспользоваться проверенными народными способами:

  • Гипсовое угощение. Приготовить его несложно, достаточно тщательно перемешать гипсовый порошок с пшеничной или кукурузной мукой. Это угощение нужно поместить в открытую емкость, банку, например. Рядом поставить блюдце с водой. Всеядные мыши мучнистым яством угостятся и запьют. Размокшая гипсовая смесь в пищеводе грызуна зацементируется и не сдвинется с места, что приведет к гибели животного от истощения и обезвоживания.
  • Содовая приманка готовится аналогично: перемешиваются равные доли соды и любой муки. Попадая в желудок мыши, сода в результате химической реакции с желудочным соком вызывает несварение пищи и внутренние кровотечения, приводящие к гибели.
  • Сладкие угощения. Смешанные в равных долях сахарный песок и известь или сахарный песок, смешанный с бурой и канифолью в одинаковых пропорциях.
  • В сухих подвалах, погребах, чердаках хозяйственных пристройках можно использовать метод щелочного напыления. Используются пищевая сода или зола. Напыление осуществляется при помощи сита в направлении от стены к выходу.

Описанные выше угощения следует оставлять на ночь, при этом освободив помещение от других доступных продуктов.

Видео: эффективные средства борьбы с грызунами


Можно бороться с мышами собственными силами: методик приведено достаточно. Можно обратиться за помощью в специализированную компанию, оказывающую населению услуги по дератизации.

Как избавиться от мышей в квартире навсегда

Способ 1: закройте щели и отверстия, сделанные мышами

Чаще всего мыши проникают в дом или квартиру через щели в стенах, плохо закрепленные плинтусы или прогрызают себе ходы во внутренних углах помещения.

Заделайте эти отверстия, чтобы лишить мышей их домика. Для этого используйте замазку, шпаклевку для щелей, для прогрызенных отверстий — гипсокартон и штукатурку, незакрепленные плинтусы зафиксируйте. Вся эта работа требует сноровки и умения, поэтому если вы не обладаете нужными навыками или необходимыми инструментами, лучше вызовите мастера.

Способ 2: используйте масло перечной мяты

Грызуны не выносят запаха перечной мяты. Для отпугивания мышей и крыс капните по несколько капель мятного масла (его можно купить в аптеке в отделе эфирных масел) на ватные шарики и расположите в местах, где могут находиться мыши (возле мусорного ведра, входных дверей, вентиляционных каналов, щелей). Грызуны и близко не подойдут к дому, где пахнет мятой.

Способ 3: сделайте гуманную ловушку

Если вы не хотите убивать зверька, используйте гуманные ловушки, которые легко можно сделать своими руками.

Для этого возьмите глубокую стеклянную миску и пятирублевую монету. Положите на пол кусочек шоколада (или любой другой еды), сверху поставьте миску одной стороной на ребро монеты. Когда мышь захочет полакомиться едой, она нарушит равновесие миски и опрокинет ее на себя. А вам останется лишь достать мышь и унести подальше от дома.

Способ 4: установите ультразвуковой отпугиватель грызунов

Если вы точно знаете, в какой части квартиры обосновались мыши или крысы, используйте специальное устройство, которое отпугивает их ультразвуком. Для людей и домашних животных он полностью безопасен. Правда, отпугиватель эффективен лишь короткий период времени: грызуны быстро к нему привыкают.

Способ 5: распылите органический репеллент

Органические репелленты не убивают крыс, а лишь отпугивают их, не давая им поселиться в вашем доме. Как правило, такие средства созданы на основе природных компонентов, которые грызуны не переносят (например, экстракт перца чили). Если на улице или в подъезде вы заметили следы мышей, используйте репеллент, и в вашу квартиру грызуны не проникнут.

Способ 6: вызовите санитарную службу

Если все вышеперечисленные способы не сработали, лучше пойти на крайние меры и уничтожить вредителей. Для этого используют специальные средства с ядами. Но лучше не применять их самостоятельно: велик риск отравления. Для этого нужно обратиться в Роспотребнадзор или вызвать частную службу по дератизации. Специалисты этой службы проведут обработку по всем правилам и расскажут о мерах безопасности после нее.

Если вы радикально хотите решить вопрос с грызунами, узнайте о других способах борьбы с ними.

Читайте советы, как избавиться от паразитов в доме:

Дизайн. Интерьер. Свежие идеи

Ищите нас в соцсетях

Еще больше советов по обустройству интерьера, новых идей и лайфхаков, которые сделают вашу жизнь комфортнее, а дом красивее.

«Старение запускается вскоре после зачатия» – Наука – Коммерсантъ

Что такое старение? Каковы его первопричины? Чему можно научиться у организмов-долгожителей? Есть ли у человечества шансы дожить до возраста библейских старцев, и если да, как это осуществить? Правда ли, что здоровый образ жизни продлевает молодость, или это не всегда так? Появится ли новый вид человека, которому вообще неведома старость? Об этом рассуждает Сергей Дмитриев, заведующий отделом взаимодействия вирусов с клеткой и лабораторией системной биологии старения НИИ физико-химической биологии им. А. Н. Белозерского МГУ, кандидат биологических наук.

— Сергей, как началась ваша работа в области биологии старения?

— Мы начали работать над этой темой благодаря сотрудничеству с профессором Гарвардской школы медицины Вадимом Гладышевым. В 2017 году мы открыли в нашем институте новую лабораторию, созданную на средства мегагранта правительства РФ.

Один из ключевых аспектов старения — ухудшение так называемого протеостаза. Протеостаз — это состояние баланса, в котором клетка или организм поддерживает свои белки, из которых мы все состоим и которые обеспечивают большинство биологических функций в клетке.

Клетка должна стремиться поддерживать свой белковый состав в нужном ей состоянии. Для этого есть два процесса, которые идут постоянно: с одной стороны, производство новых белков, биосинтез, а с другой — уничтожение, деградация тех белков, которые либо не нужны, либо были «испорчены». Баланс между синтезом и деградацией белков определяет динамическое равновесие в клетке.

Проблема в том, что с возрастом этот баланс начинает ухудшаться. Клетки перестают отслеживать изменения протеостаза, в результате накапливаются «испорченные», «неправильные» белки, и в итоге в организме все, что называется, идет вразнос. Конечно, это всего лишь одно из проявлений старения, но его эффект очень серьезен.

В научной литературе есть довольно много работ, посвященных процессу деградации белков. А вот про то, как изменяется биосинтез белка, известно совсем немного. Наш проект, поддержанный мегагрантом, был направлен как раз на эти исследования.

— В чем состояла идея проекта?

— В том, чтобы посмотреть на мышах, как в разных органах изменяется биосинтез белка с возрастом. Есть такой метод — рибосомный профайлинг. Рибосома — это молекулярная машина, синтезирующая белок в клетке по матрице РНК, где при помощи генетического кода закодирована последовательность белка. Иными словами, биосинтез белка — это не только химическая реакция, но одновременно еще и раскодирование информации, перевод ее на другой язык.

Рибосомный профайлинг позволяет системно увидеть картину биосинтеза белка в клетке или живой ткани. У человека, как и у мыши, есть более 20 тыс. генов, кодирующих белки, и можно сделать подобие фотоснимка, из которого будет понятно, с каких из них в данный момент синтезируются белки и в каком количестве.

Это сложный высокотехнологичный метод, которым в мире пока владеет довольно небольшое количество научных групп. Мы применили этот метод к печени и почкам мышей разного возраста. Взяли шесть возрастов мышей от «юности» до глубокой старости. Самые пожилые, мыши-«мафусаилы», доживают до трех с небольшим лет. Надо сказать, пожилых мышей в вивариях найти вообще очень непросто.

— Почему так?

— В вивариях их держат для экспериментов, после которых обычно забивают. До «пенсии» мало кто доживает. Наш партнер по мегагранту Вадим Гладышев раздобыл таких дефицитных мышей в США, где есть специальная программа по изучению старения на мышах. В ней на этих животных тестируют различные геропротекторы, которые потенциально могут продлить жизнь — сначала мышам, потом людям. Поэтому мышей-долгожителей там, в отличие от России, найти гораздо проще.

— У нас и люди-то пожилые живут не очень долго, что уж говорить о мышах…

— Шутки шутками, а это действительно большая проблема. С содержанием мышей, которые служат важным объектом для многих биомедицинских исследований, у нас просто беда. Дело в том, что производимые в нашей стране корма для мышей не выдерживают никакой критики. Коллеги, регулярно проводящие вскрытия мышей, часто обнаруживают их органы в плачевном состоянии. Употребляя такие корма, мыши даже не хотят размножаться.

— Еще и поэтому они не доживают до преклонного возраста.

— Совершенно верно. Так вот, из органов американских мышек, откормленных «правильными» кормами, мы получили молекулярные библиотеки для рибосомного профайлинга, потом проанализировали этот материал на секвенаторе нового поколения. Наши биоинформатики обработали полученные данные, и в результате мы смогли понять, как изменяется биосинтез белка, продукты каких генов синтезируются в большем или меньшем количестве и какие вообще существуют тенденции в процессе старения мыши. Самой старой мыши было 32 месяца — по человеческим меркам это около 90 лет.

— Какие же тенденции вы обнаружили?

— Мы увидели серьезные сдвиги в экспрессии генов, которые приводят к изменениям в метаболических процессах и к нарушениям в сворачивании белков. Действительно известно, что и у людей с возрастом чаще проявляются такие болезни, как диабет, а на фоне активного отложения белковых агрегатов развиваются нейродегенеративные заболевания — например, болезнь Альцгеймера.

Кроме того, с возрастом усиливаются нездоровые проявления иммунитета. Сейчас считается уже доказанным, что один из флагманов старения — это системное, или стерильное воспаление. Это не то воспаление, которое возникает в ответ, например, на травму или инфекцию: такое воспаление считается нормальным, здоровым, необходимым для выздоровления. А вот при старении активируется хроническое воспаление, не связанное с проникновением в организм бактерий, то есть стерильное.

— Почему этот процесс называется воспалением, если нет инфекции?

— Вообще-то воспаление — это механизм, который вызывают не бактерии или вирусы, его запускает сам организм. В молодости это происходит только тогда, когда в этом есть потребность. Но когда человек стареет, контролирующие механизмы начинают работать все хуже, и многие процессы активируются или, наоборот, подавляются, когда это не нужно. В частности, организм включает механизм воспаления, и мы видим примерно те же маркеры в органах и тканях, что возникают при травмах или инфекционных заболеваниях. Такое воспаление может вызывать самые разные патологии, что мы обычно и наблюдаем у пожилых людей.

— Вы попытались как-то повлиять на этот процесс?

— Системное воспаление — это лишь одно из звеньев в цепи причин и следствий, возникающих в ходе старения на уровне всего организма. Мы думаем, что повлиять на процесс можно, только лишь найдя первопричины старения клеток или тканей. И мы постарались эти первопричины найти.

Новое, что мы смогли с помощью нашего подхода обнаружить,— это то, что со временем в клетке начинает понижаться уровень производства новых белков. Мы выяснили механизм этого процесса. Оказалось, что при старении начинают хуже нарабатываться компоненты самого белок-синтезирующего аппарата. Получается, клетка с возрастом все меньше синтезирует тех белков, которые нужны ей для производства самих же белков.

Наша интерпретация — стареющая клетка, замечая сбой протеостаза и накопление «неправильных» белков, пытается исправить ситуацию и начинает меньше их синтезировать.

Можно привести такую аллегорию. Живущий в маленькой комнате человек бросает мусор прямо на пол, а собирает и выносит его из комнаты редко и неохотно. Постепенно мусора становится все больше, и тогда он решает меньше мусорить. Но мы понимаем, что единственный способ решить проблему — чаще проводить уборку, иначе все закончится коллапсом, когда человек окажется погребен под собственным хламом.

Видимо, клетка тоже пытается начать меньше «мусорить». Но это имеет оборотную сторону. Белки имеют свойство со временем «портиться», в норме на их место должны постоянно приходить новые молекулы тех же белков. А если мы начинаем меньше их синтезировать, то такого обновления происходить не будет. В результате клетка стареет еще больше.

— Значит, мы должны научить наши клетки активно синтезировать белки, как это делают молодые?

— Думаю, да, но одновременно с этим нужно обеспечить эффективное устранение «неправильных» белков — своевременный «вынос мусора».

— Как же это сделать?

— Как это сделать, мы пока не знаем. Но в нашей работе мы обнаружили молекулярный механизм, который ведет к такому снижению уровня наработки белков. Он связан с одним из сигнальных путей, который используется в клетке для передачи информации, так называемым каскадом mTOR. Это очень важный путь, который регулирует уровень и синтеза, и распада белков. Оказалось, что с возрастом он подавляется.

В фармакологии известны вещества, которые делают примерно то же самое — подавляют эту активность mTOR. Среди них наиболее известен рапамицин, названный так в честь острова Пасхи (другое название Рапа-Нуи), где это вещество было обнаружено в одном из местных микроорганизмов. Это иммуносупрессор, который уже давно используется в медицинской практике, в частности, в трансплантологии. Но еще про него известно, что он увеличивает время жизни некоторых организмов. Испытания этого вещества как геропротектора уже проводятся, и многие исследователи верят, что за ним большое будущее.

— А вы так не считаете?

— Он действительно продлевает жизнь мышам, но я считаю, что все не так просто. Включение рапамицина в диету приводит к тому, что клетки как бы заранее готовятся к старости — синтезируют меньше белка, чтобы было меньше «мусора». Однако это, скорее всего, не делает организм более молодым — из нашей работы можно заключить, что это больше похоже на паллиативную меру, и потому ждать тут какого-то принципиального прорыва не стоит.

— Есть публикации о том, что рапамицин не продлевает, а, наоборот, сокращает жизнь мышам. Что вы об этом думаете?

— Интервенции, которые продлевают жизнь, часто дают неоднозначные результаты. На разные организмы и даже разные линии мышей одни и те вещества могут оказывать разное действие: в одном случае продлевать жизнь, в другом — нет, а иногда и вовсе работать в противоположную сторону.

Например, самый известный способ продления жизни — это умеренное ограничение питания. Показано, что он действует на многие организмы, от дрожжей и червей до приматов. Но сейчас выясняется, что это работает далеко не всегда.

У некоторых мышей такое ограничение калорий не дает никакого эффекта или даже укорачивает жизнь.

— В каких именно условиях это может произойти?

— Точно сказать нельзя. Возможно, для таких мышей просто следует подобрать другие дозы корма, с меньшим ограничением. Однако, как бы там ни было, переедание и нездоровая диета уж точно не помогут никому прожить дольше — ни мышам, ни людям. Другие элементы здорового образа жизни, такие как физическая активность, отказ от курения, умеренность в употреблении алкоголя, к счастью, работают.

В области биологии старения сейчас идет процесс интенсивного накопления знаний. Здесь есть несколько направлений. Это и попытки понять, что именно меняется в организме с возрастом, и оценка воздействия разного рода интервенций, и клеточная терапия, и трансплантация органов, выращенных внутри животных. Уже скоро появится возможность выращивать органы, которые генетически будут идентичны донору, потому что их будут выращивать из взятых у него клеток. Взяли кусочек кожи, перепрограммировали клетки, подсадили, например, в эмбрион свиньи — и вырастили в нем нужный человеку орган, который можно потом пересадить ему обратно. Например, почку. Причем это будет орган, полностью сделанный из размноженных клеток самого человека, поэтому отторгаться он не будет. Это абсолютно реалистичные вещи, завтрашний день медицины.

— Директор вашего института академик В. П. Скулачев говорит о том, что старение — это запрограммированный процесс, и наша задача — изменить эту программу. Вы с этим согласны?

— Я не сторонник этой точки зрения. По моему мнению, нет какой-то отдельной, специально включаемой в определенном возрасте программы старения. По крайней мере, у человека.

Старение происходит само собой, это стохастический процесс, причем он запускается даже не с момента взросления, а еще раньше — вскоре после зачатия.

Поэтому изменить ситуацию каким-то простым воздействием — «взломать программу», как говорят сторонники этой теории, едва ли получится.

— Но почему тогда существуют нестареющие организмы?

— Действительно, мы знаем, что в природе есть практически нестареющие организмы. Вот у них, по-видимому, действительно есть программа — я бы назвал ее «программой нестарения». В ходе долгой эволюции этим организмам удалось выработать у себя механизмы, которые более эффективно препятствуют стохастическому процессу старения. Они «научились» более эффективно исправлять происходящие поломки и нарушения в работе разных систем. Это видно при анализе геномов, транскриптомов, протеомов долгоживущих животных — таких, как голые землекопы или летучие мыши, которые живут поразительно долго для млекопитающих такого размера. Ведь в целом чем больше размеры у вида животного, тем дольше его средняя продолжительность жизни.

Кстати, человек тоже живет подозрительно долго для своих средних размеров — по-видимому, в ходе нашей эволюции в какой-то момент сложился тренд на увеличение продолжительности жизни, и это не может не радовать.

— Но человек хочет жить еще дольше, в связи с чем возникает сакраментальный вопрос: можем ли мы чему-то научиться у других долгоживущих организмов?

— Для этого их и изучают. В результате таких исследований ученые приходят к выводу, что единого рецепта тут нет. Механизмы долгожительства у разных организмов, по-видимому, разные. Наверное, можно набраться «мудрости» у каждого из них и в будущем попробовать активировать такие механизмы и у человека. Генетически мы ведь не так уж и сильно отличаемся от других млекопитающих: большинство молекулярных путей и компонентов у нас очень сходны, разница лишь во времени их активации и немного различающейся регуляции.

Возможно, в будущем появятся фармакологические и генно-терапевтические воздействия, основанные на этих принципах. Не вижу тут ничего невозможного. Но принципиального удлинения этот путь, скорее всего, не даст.

— Удастся ли нам в принципе решить этот вопрос радикально? Скажем, жить до 120–130 лет и при этом хорошо себя чувствовать?

— В этих пределах — да, наверное, возможно. Речь, разумеется, не о том, чтобы пытаться всеми силами обеспечить существование до 120 лет дряхлыми стариками, увеличивать имеет смысл в первую очередь так называемый healthspan, продолжительность жизни без хронических заболеваний. Думаю, в течение ближайших десятилетий здесь будут взяты новые рубежи, и тогда пенсионный возраст придется снова увеличивать. Но все равно едва ли человечеству удастся взять планку в 150 лет — во всяком случае, с помощью тех подходов, которые могут быть разработаны в ближайшее время, это сделать не получится.

— Могут ли появиться принципиально новые подходы, которые подарят человечеству возможности библейских долгожителей?

— Качественный рывок здесь мог бы произойти с помощью генной инженерии, когда мы меняем набор белков у человека в зародыше, делая из вида Homo sapiens другой долгоживущий вид — условно говоря, «человека продленного».

— Но это будет уже не совсем человек?

— Совершенно верно. Однако я не уверен, что человечество когда-либо пойдет на это. К счастью, есть еще один подход, связанный с частичным репрограммированием клеток уже сформированного, взрослого организма (в том числе постаревшего) — так называемый эпигенетический откат. Каждый ребенок рождается молодым, хотя его родители к этому времени уже прошли изрядный жизненный путь, и вместе с ними повреждения накапливали и их половые клетки. Но после зачатия возраст клеток эмбриона, который из них получился, в какой-то момент обнуляется. Если научиться воспроизводить это чудо в клетках взрослого организма, можно будет регулярно пополнять запас наших стволовых клеток, а они затем будут естественным путем восстанавливать наши ткани. Сейчас существуют подходы, позволяющие ненадолго активировать во «взрослой» клетке такие механизмы, но они связаны с большим риском заполучить рак. Если мы научимся строго контролировать эти процессы, то это может стать настоящим прорывом в области борьбы со старением.

Беседу вела Наталия Лескова

Человеческие антимышиные антитела – обзор

3.

32.5 Разработка расширенной функциональности домена mAb

Первоначально терапевтические mAb были разработаны с использованием мышиных субстратов. Однако низкая эффективность и побочные эффекты, частично обусловленные выработкой человеческих антимышиных антител, ограничивают их терапевтическую применимость. Проблема иммуногенности в значительной степени решалась за счет использования химерных и гуманизированных продуктов. Использование трансгенных мышей с удаленными мышиными генами IgG и заменой их соответствующими человеческими генами IgG [4] и библиотек фагового дисплея человека позволило разработать mAb человека.Об успехе моделей трансгенных мышей для разработки человеческих mAb свидетельствует тот факт, что четыре антитела, лицензированные в 2009 году, были созданы с использованием этой технологической платформы. В настоящее время основное внимание уделяется разработке терапевтических антител для тонкой настройки механизма действия для лучшего удовлетворения терапевтических потребностей. В этом разделе основное внимание уделяется стратегиям, используемым для изменения функциональности mAb.

Конструирование Fc-цепи IgG является интенсивной областью исследований в связи с ролью Fc-домена в определении эффекторной функции антитела и периода его полужизни.Одной из целей этой области разработки продуктов является разработка mAb с точно настроенными механизмами действия. С этой целью исследования привели к идентификации одиночных точечных мутаций, которые значительно изменяют эффекторную функцию [36]. Например, были идентифицированы точечные мутации в цепи Fc, которые повышают аффинность к рецепторам Fcγ (FcγR), таким как FcγRI или FcγRIII, без нарушения способности антитела связываться с неонатальным рецептором Fc (FcRn) или с компонентом комплемента, C1q. . Эффекторная функция IgG также была усилена введением точечных мутаций в Fc-домен, которые снижают аффинность антитела к отрицательному регуляторному FcR, FcγRIIB, который подавляет эффекторную функцию при взаимодействии с IgG.

Из-за важности гликозилирования mAb для эффекторной функции Fc-области несколько стратегий, используемых для создания mAb, у которых отсутствует эффекторная функция Fc-области, включают целенаправленное устранение гликозилирования Fc-области для уменьшения взаимодействий FcR и комплемента. Например, гликозилированные антитела были созданы либо с помощью системы экспрессии Escherichia coli , которая естественным образом продуцирует агликозилированные белки, либо путем введения точечной мутации в сайт гликозилирования Fc-области (N297) [36].

Интересно, что другие группы продемонстрировали, что гликозилирование не так строго необходимо для вовлечения FcγR, как считалось ранее. Например, с помощью скрининга дрожжевого дисплея были идентифицированы агликозилированные варианты Fc, которые сохранили способность взаимодействовать с FcγR [32]. В другом исследовании с использованием метода скрининга бактериального дисплея/проточной цитометрии и системы экспрессии E. coli были идентифицированы варианты агликозил-Fc с наномолярной аффинностью к FcγRI, которые сохраняли эффекторную функцию in vitro [19].Эти исследования открывают возможность разработки антител, у которых отсутствует гликозилирование и, таким образом, они обладают меньшей гетерогенностью, но сохраняют эффективную эффекторную функцию Fc-домена. Только клинический опыт покажет, повысят ли последовательности, ответственные за независимую от гликозилирования эффекторную функцию, иммуногенность этих продуктов и, возможно, повлияют на их терапевтическое применение.

Поскольку гликозилирование значительно влияет на FcγR- и C1q-опосредованную эффекторную функцию IgG [18], другой подход, предпринятый для модификации эффекторной функции антител, включал разработку гликоинженерных антител, оптимизированных для предполагаемого механизма действия.Было показано, что клетки CHO, в которых отсутствуют ферменты, необходимые для фукозилирования, дают антитела, обладающие более высоким сродством к FcγRIII и улучшенной активностью ADCC без влияния на связывание с человеческими FcγRI, C1q или FcRn [18, 36]. Другие сконструировали клетки CHO с индуцируемой экспрессией ферментов, модифицирующих гликозилирование, для выработки антител с повышенной ADCC [36]. Использование модифицированных клеток СНО является привлекательной производственной платформой, поскольку позволяет производить антитела с эффекторной функцией или без нее в зависимости от предполагаемого терапевтического применения.Потенциальным дополнительным преимуществом этого подхода является производство антител с более гомогенными профилями гликозилирования и возможность того, что такие модифицированные продукты будут иметь аналогичную или повышенную клиническую эффективность, как и их немодифицированные аналоги, но в более низких дозах.

Стратегии получения антител с гуманизированными профилями гликозилирования в клеточных субстратах, отличных от млекопитающих, также разрабатываются в надежде снизить риск заражения случайными агентами, а также снизить производственные затраты, связанные с субстратами клеток-хозяев млекопитающих [6]. Антитела с профилями гликозилирования, подобными профилям антител, продуцируемых в субстратах клеток млекопитающих, были получены в растительных клетках, совместно экспрессирующих конструкцию антитела и фермент галактозилтрансферазу человека [1]. Кроме того, штаммы дрожжей с гуманизированным механизмом гликозилирования были разработаны и успешно использованы для получения продуктов Fab и scFv; однако генерация полноразмерных антител оказалась проблематичной из-за сложной структуры интактных IgG [6].

Вторая область инженерии Fc-домена сосредоточена на модификации периода полужизни антител либо для увеличения биодоступности за счет увеличения периода полужизни в сыворотке, либо для уменьшения периода полужизни в сыворотке для снижения нецелевой цитотоксичности.Экспериментальные данные идентифицировали несколько аминокислот в домене Fc, которые увеличивают или уменьшают ассоциацию антитела с рецептором FcRn, что в некоторых случаях было связано с изменением периода полужизни в сыворотке на животных моделях [4]. Поскольку на период полужизни антител в сыворотке может влиять множество факторов, включая влияние внутриклеточного pH на аффинность связывания FcRn [27], только клинический опыт с терапевтическими мутантами mAb с увеличенным периодом полужизни, такими как MEDI-557 (Weblink), даст информацию о полезности этих модификаций.

Достижения в области Fc-доменов и гликоинженерии открывают перспективы для будущей разработки терапии mAb с повышенной эффективностью благодаря оптимизации их in vivo терапевтической активности. Эти достижения также открывают двери для уникальных атрибутов качества, которые необходимо характеризовать и контролировать [37]. Во-первых, крайне важно, чтобы сконструированные антитела были тщательно охарактеризованы в отношении их потенциальной эффекторной функции, чтобы установить, имели ли модификации предполагаемый или, возможно, непреднамеренный эффект (эффекты) [27].Во-вторых, необходимо охарактеризовать влияние мутаций на физико-химические характеристики, такие как стабильность белка и агрегация белка. Как упоминалось ранее, необходимо контролировать возможность повышенной иммуногенности модифицированных продуктов mAb, поскольку изменения аминокислотных остатков или гликозилирование могут привести к появлению эпитопов с повышенной иммуногенностью [37].

Антимышиное IgG (Fc-специфическое) антитело Антимышиное антитело Fc

Общее описание

Иммуноглобулин G (IgG) относится к семейству иммуноглобулинов и представляет собой широко экспрессируемое сывороточное антитело.Иммуноглобулины имеют две тяжелые цепи и две легкие цепи, соединенные дисульфидной связью. Это в основном помогает в иммунной защите. Это гликопротеин. IgG представляет собой основной класс иммуноглобулинов. Мышь состоит из пяти классов иммуноглобулинов — IgM, IgG, IgA, IgD и IgE. Мышиный IgG далее делится на пять классов: IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3. IgG помогает в опсонизации, фиксации комплемента и антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности.

Иммуноген

Fc-фрагмент IgG, очищенный от мыши.

Применение

IgG против мыши IgG (FC Conficate) Антитело, полученные в козе.

IgG-антитела играют решающую роль в гуморальных иммунных реакциях, таких как активация комплемента, фагоцитоз, плацентарный транспорт и связывание рецепторов клеточной поверхности. Антигенсвязывающая активность опосредуется вариабельной областью Fab антител IgG, тогда как эффекторная активность стимулируется доменом Fc.Антитело против IgG мыши (Fc-специфичное) можно использовать для обнаружения агентов оптимального захвата.

Иммуноглобулин G (IgG) участвует в реакциях гиперчувствительности типа II и типа III. Это в основном помогает в иммунной защите. IgG помогает в опсонизации, фиксации комплемента и антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности.

Прочие Примечания

Антитело, адсорбированное с белками бычьей, лошадиной и человеческой сыворотки.

Физическая форма

Раствор в 0,01 М фосфатно-солевом буфере, рН 7.4, содержащий 15 мМ азида натрия.

Замечания по подготовке

Адсорбируется для уменьшения фонового окрашивания образцов крупного рогатого скота, лошади или человека.

Отказ от ответственности

Если иное не указано в нашем каталоге или другой документации компании, сопровождающей продукт(ы), наши продукты предназначены только для использования в исследовательских целях и не должны использоваться для каких-либо других целей, включая, помимо прочего, несанкционированное коммерческое использование, диагностическое использование in vitro, терапевтическое использование ex vivo или in vivo или любой тип потребления или применения для людей или животных.

Антимышиные антитела | Био-Рад

Мышь (Mus musculus или домовая мышь) — ценный инструмент для биомедицинских исследований. Мыши маленькие, их легко разводить, они очень плодовиты и имеют короткий жизненный цикл по сравнению с другими млекопитающими.

Мышей использовали в качестве животных моделей для изучения болезней человека, рака и иммунологии. Мыши также используются в нейробиологии, где обычно предпочтение отдается крысам.

Относительная легкость гомологичной рекомбинации у видов мышей привела к открытию в 1989 году метода нокаута гена, важное значение которого было подтверждено присуждением Нобелевской премии по медицине в 2007 году.Секвенирование генома мыши в 2000 году еще больше расширило потенциал этой модели мелких млекопитающих, подчеркнув исключительное сходство ее генов с человеческими аналогами.

Bio-Rad предлагает около 4000 антимышиных антител и иммунологических реагентов , охватывающих области исследований иммунологии, апоптоза, аутофагии, стволовых клеток и неврологии.

Эксклюзивный производитель

Мы являемся эксклюзивным производителем многих ключевых антимышиных антител, таких как F4/80 (клон Cl:A3-1), самый известный маркер для зрелых мышиных макрофагов и моноцитов крови, цитируемый в более чем 350 рецензируемых статьях, Ly6B.2 (клон 7/4), CD206 (клон MR5D3), анти-Дектин-1 (клон 2A11) и анти-CD11b (клон 5C6). Наше предложение дополняет обширный каталог маркеров компакт-дисков для мышей, доступный с помощью нашего простого в использовании инструмента Mouse CD Maker Tool .


Наш ассортимент антимышиных антител


Вторичные антитела против мышиных иммуноглобулинов

Наш ассортимент вторичных антител против мыши доступен во многих форматах и ​​полезен в широком диапазоне применений, включая проточную цитометрию (FITC и RPE), иммуноцитохимию (HRP и Alk.Phos.) и Вестерн-блоттинг (HRP и биотин)


Производство моноклональных антител мыши

Виды мышей также используются для производства антител, в основном моноклональных антител. Принцип метода был открыт в 1975 году, а ученые, участвовавшие в нем, были удостоены Нобелевской премии по медицине в 1984 году.

Специализированные пакеты Bio-Rad для производства мышиных моноклональных антител могут удовлетворить требования вашего проекта и поддержать ваши исследования. Наш пакет для создания гибридом включает в себя:

  • Иммунизация 5 мышей

  • Продукция антигена или конъюгация (при необходимости)

  • Скрининг методами дот-блоттинга и ИФА

  • Слияние клеток

  • Поставка положительных клонов для оценки клиентов

  • Слияние клеток

  • Расширение и поставка не менее 2-х клонов в цель

  • Воссоздание

  • Размножение гибридом


Инструменты для производства антител

Продукты для производства антител, такие как набор для изотипирования или средство для удаления микоплазмы (код продукта BUF035), наборы для маркировки и конъюгации Наборы для быстрой конъюгации LYNX® (коды продуктов LNK001 LNK142 ), помогут вам разработать собственный проекты по разработке антител

Преобразование моноклонального антитела против мышиного CD4 в агент визуализации позитронно-эмиссионной томографии scFv для продольного мониторинга CD4+ Т-клеток

Ключевые моменты

  • ПЭТ-трассер.

  • Этот короткоживущий пегилированный зонд может неинвазивно контролировать CD4 + Т-клеток у мышей.

  • Этот подход должен быть применим к любому клинически полезному Ig.

Abstract

Иммуно-позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ), неинвазивный метод визуализации, может обеспечить динамический подход для продольной оценки представляющих интерес клеточных популяций. Трансформация mAb в агенты визуализации ПЭТ на основе одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv) позволила бы неинвазивно отслеживать in vivo широкий спектр возможных мишеней.Мы использовали ферментативное мечение, опосредованное сортазой, в сочетании с ПЭГилированием для разработки агента визуализации ПЭТ против мышиного CD4 scFv, сконструированного из mAb против мышиного CD4. Этот анти-CD4 scFv может отслеживать распределение CD4 + Т-клеток in vivo с помощью иммуно-ПЭТ. Мы отслеживали CD4 + и CD8 + Т-клетки у мышей дикого типа, у иммунодефицитных реципиентов, воссозданных моноклональными популяциями Т-клеток OT-II и OT-I, и в модели меланомы B16. Иммуно-ПЭТ против CD4 и -CD8 показало, что персистенция как CD4 + , так и CD8 + Т-клеток, перенесенных иммунодефицитным мышам, улучшалась, когда реципиентов иммунизировали OVA в CFA.У животных с опухолями инфильтрация CD4 + и CD8 + Т-клеток увеличивалась по мере роста опухоли. Подход, описанный в этом исследовании, должен быть легко применим для преобразования клинически полезных антител в соответствующие агенты визуализации ПЭТ scFv.

Введение

Понимание иммунного ответа требует знания местонахождения клеток и молекул, ответственных за его выполнение. В доклинических исследованиях оценку распределения иммунных клеток in vivo обычно проводят путем иссечения вторичных лимфоидных органов после эвтаназии.Это затрудняет лонгитюдную оценку ответов, подход, в основном ограниченный частичной спленэктомией или анализом периферической крови, взятой в различные моменты времени. Для неинвазивного отслеживания иммунных реакций против опухолей и инфекционных агентов был бы желателен более динамичный анализ распределения лимфоцитов у живых животных. Особенно полезными были бы методы, не основанные на генетической модификации отслеживаемых типов клеток. Эта цель достижима с помощью неинвазивного метода визуализации, такого как позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) (1–3).

Разработка визуализирующих агентов для ПЭТ касается двух широких категорий: малых молекул и биологических препаратов. Из-за их обычно коротких периодов полураспада фармакокинетика многих малых молекул, подлежащих визуализации, выигрывает от использования короткоживущих изотопов ПЭТ, таких как 18 F ( t 1/2 = ~110 минут) или 11 C ( t 1/2 = ~20 минут), что создает уникальные и очевидные проблемы с точки зрения их синтеза, последующей обработки и очистки (4).Напротив, биологические препараты, такие как Ig, имеют длительный период полураспада в кровотоке и поэтому требуют установки более долгоживущих изотопов ПЭТ, таких как 64 Cu ( t 1/2 = ~12 часов) или 89 Zr ( т 1/2 = ∼3,3 сут) (5, 6). Последние подходы, как правило, плохо совместимы с протоколами визуализации в тот же день. Это вдохновило на поиск меньших форматов, полученных из Ig, и других каркасов, полученных из белков, в качестве визуализирующих агентов.

Одноцепочечные вариабельные фрагменты (scFv) широко используются в качестве минимальной единицы распознавания, которую можно выделить из обычных двухцепочечных Ig.Они состоят из частей V H и V L , соединенных линкером. ScFv пользуются популярностью в качестве строительных блоков для создания химерных рецепторов Ag и биспецифических привлекающих Т-клеток (7, 8). Если бы было возможно преобразовать полноразмерные Ig в агенты визуализации на основе scFv, это позволило бы проводить неинвазивную оценку распределения in vivo широкого спектра мишеней, распознаваемых доступными mAb. Однако использование моновалентных фрагментов scFv для ПЭТ имело ограниченный успех (9–11).С точки зрения регулирования, конверсия клинически одобренных Ig может быть предпочтительнее, чем создание de novo подходящего нанотела с аналогичной специфичностью, для которого предполагается использование у людей. В этом исследовании мы демонстрируем возможность преобразования mAb в препарат scFv, подходящий для ПЭТ-визуализации CD4 + Т-клеток.

Обычно используемые процедуры мечения Ig и их фрагментов основаны на химии малеимида для нацеливания на остатки цистеина или производных N -гидроксисукцинимида для модификации боковых цепей лизина (12, 13).Установка неспаренного цистеина с помощью генной инженерии или мягкое восстановление существующих дисульфидов являются методами выбора для модификации доступных групп -SH. Таким образом, scFv, снабженные свободным Cys на С-конце, могут быть помечены либо флуоресцентно, либо другими выбранными заместителями. Методы химической модификации могут быть заменены химико-ферментативными методами, преимуществами которых являются сайт-специфичность, высокий выход и гомогенность желаемого модифицированного продукта (14, 15).

Изучая свойства нанотел в качестве агентов визуализации ПЭТ, мы обнаружили, что их эффективность может быть улучшена за счет введения фрагмента полиэтиленгликоля (ПЭГ) в зависимости от места в дополнение к хелатору металла, используемому для мечения с помощью 89 Zr (16 ). Неспецифическое поглощение в органах элиминации, таких как почки, печень и мочевой пузырь, было резко снижено для 89 Zr-меченого пегилированного нанотела против CD8 по сравнению с его аналогом, не содержащим ПЭГ-заместителя.

В этом исследовании мы применили ту же стратегию ферментативного мечения и ПЭГилирования к модификации scFv против мышиного CD4. Сравнение пегилированного и непегилированного моновалентного scFv показало улучшенные характеристики в ПЭТ для пегилированного агента, с результатами, сравнимыми с теми, о которых сообщалось для диател (17). Мы использовали ПЭТ-датчики CD4 и CD8 для записи распределения in vivo CD4 + и CD8 + Т-клеток у мышей дикого типа, у животных с опухолями и у мышей с дефицитом RAG, восстановленных моноклональными популяциями CD4 + и CD8 + Т-клетки.Подход, описанный в этом исследовании для превращения интактного Ig в пегилированный scFv, должен быть легко применим к любому клинически применимому Ig. Таким образом, должно быть возможно превратить терапевтически полезные Ab в визуализирующие агенты на основе scFv в качестве средства отслеживания распределения распознанных мишеней.

Материалы и методы

Мыши

Процедуры на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Бостонской детской больницы (протокол 19-12-4075R).Самки мышей C57BL/6J (000664), мыши с нокаутом RAG1 (RAG1 -/- ; 002216), трансгенные мыши OT-I TCR (003831) и трансгенные мыши OT-II TCR (004194) были приобретены в лаборатории Джексона. Всех мышей помещали в особую свободную от патогенов среду и использовали в возрасте 6–12 недель.

Анализ Abs и FACS

Клетки из селезенки и лимфатических узлов мыши выделяли путем измельчения органов через сито с размером пор 40 мкм (Corning) в среде RPMI 1640 с добавлением 10% термоинактивированной FBS.Эритроциты лизировали с использованием раствора хлорида аммония (STEMCELL Technologies). Клетки промывали и ресуспендировали в FACS-буфере (PBS, 2% FBS и 1 мМ ЭДТА) с последующим окрашиванием в течение 30 мин при 4°C. Затем окрашенные клетки промывали и анализировали с помощью BD LSRFortessa с последующим анализом данных с использованием программного обеспечения FlowJo v10 (Tree Star). Для окрашивания использовали меченный флуоресцеином анти-CD4 scFv (GK 1.5), полученный, как описано ниже, и следующие антитела, конъюгированные с флуоресцентным красителем: анти-CD3 (145-2C11), анти-CD4 (RM4-5), анти-CD4 (RM4-5). CD8α (53-6.7), анти-CD19 (eBio1D3) и анти-CD45.1 (A20). Жизнеспособность клеток измеряли с помощью набора Aqua Dead Cell Stain Kit (Thermo Fisher Scientific).

Конструирование и экспрессия scFv против CD4

Опубликованные последовательности V H и V L , кодирующие анти-CD4 мыши (клон GK 1.5), были собраны в следующей ориентации (18): V H , a 15 -aa линкер (G 4 S) 3 и V L , С-концевой мотив распознавания сортазы (LPETG) и шестигистидиновая метка (фиг.1А). Для клонирования scFv против CD4 в вектор экспрессии pHEN6 использовали праймеры с перекрывающимися комплементарными последовательностями на 3′- и 5′-концах (таблица I). Очищенный продукт ПЦР scFv против CD4 клонировали в линеаризованный вектор экспрессии pHEN6 с использованием набора для клонирования Gibson Assembly в соответствии с инструкциями производителя (New England Biolabs). Рекомбинантные клоны трансформировали в компетентные DH5α Escherichia coli (New England Biolabs). Отдельные колонии использовали для выделения плазмидной ДНК (Omega Bio-Tek) и секвенирования GENEWIZ Sanger.Клон правильной последовательности трансформировали в компетентную WK6 E.coli для рекомбинантной экспрессии анти-CD4 scFv. Затем WK6 E. coli выращивали в бульоне Terrific, содержащем ампициллин (100 мкг/мл), при 37°C; при достижении ОП 600 0,8–0,9 добавляли 1 мМ ИПТГ и продолжали рост клеток при 30°С в течение ночи. Приблизительно через 20 ч клетки собирали. Анти-CD4 scFv высвобождали осмотическим шоком с использованием буфера TES (24,2 г/л Трис, 0,19 г/л ЭДТА и 171.15 г/л сахарозы [pH 7,8]) и очищали на гранулах Ni-NTA (QIAGEN) с последующим концентрированием scFv в PBS с использованием центробежного фильтра с отсечкой 10 кДа (Millipore). Размер и массу очищенного анти-CD4 scFv подтверждали с помощью SDS-PAGE и жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС).

Мечение сортазой анти-CD4 scFv

(Gly) 3 -Lys-флуоресцеин и (Gly) 3 -Lys-дефероксамин (DFO)-азид для использования в качестве нуклеофилов в реакциях сортазы, синтезированы стандартный твердофазный синтез пептидов, как описано ранее (19).Пентамутантную сортазу А использовали для специфической модификации сайта С-конца анти-CD4 scFv (фиг. 1D). Типичная реакционная смесь содержала анти-CD4 scFv (2 мг/мл), 600 мкМ нуклеофила, 20 мкМ сортазы А и 10 мМ CaCl 2 . Реакции проводили в течение 2 ч при 20°C, обычно выходя >80% меченой конструкции. Остаточный непрореагировавший scFv, субстрат сортазы и избыток нуклеофила удаляли истощением на гранулах Ni-NTA с последующей стадией обессоливания на колонке для обессоливания PD-10 (GE Healthcare) с элюированием PBS.

Модификации scFv анти-CD4 для мечения радиоактивным изотопом

Перед радиоактивным мечением анти-CD4 scFv, конъюгированные с DFO-азидом, пегилировали для увеличения периода полувыведения из кровотока (16). 5-кратный молярный избыток 10-кДа или 20-кДа ПЭГ-дибензилциклооктина (Click Chemistry Tools) добавляли к раствору, содержащему 0,5–1,0 мг хелексированного анти-CD4 scFv-DFO-азида (Sigma-Aldrich). для удаления двухвалентных катионов. Реакционную смесь инкубировали при перемешивании в течение 20–24 ч при 7°C, чтобы позволить протекать клик-реакции, обычно с выходом >90% пэгилированного продукта.Размер пегилированного продукта подтверждали с помощью SDS-PAGE. Для мечения радиоактивным изотопом исходный раствор 89 Zr 4+ в 1 М щавелевой кислоте, соответствующий 3–5 мКи, доводили до pH 6,8–7,5 с помощью 2 М Na 2 CO 3 . Объем исходного раствора 89 Zr 4+ , содержащего 1,0–1,5 мКи радиоактивности, добавляли к хелексированному пегилированному анти-CD4 scFv-DFO. Реакционную смесь инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с последующим обессоливанием на колонке для обессоливания PD-10, элюируя PBS.Радиохимический выход радиоактивно меченой конструкции с поправкой на распад составлял >80% (0,8–1,3 мКи).

Иммуно-ПЭТ-визуализация CD4

+ и CD8 + Т-клеток

20-кДа ПЭГ-модифицированный анти-CD8-модифицированный вариабельный фрагмент H-цепи, содержащий только антитела (VHH), использовали для иммуно-ПЭТ-визуализации CD8 + Т-клетки (16, 20). ПЭТ-компьютерную томографию (КТ) выполняли в соответствии с процедурами, описанными в другом месте (20). Вкратце, мышей C57BL/6J анестезировали изофлураном и вводили ретроорбитально ∼50 мкКи (1850 кБк) радиоактивно меченого анти-CD4 scFv или анти-CD8 VHH.Через 24 часа мышей визуализировали с помощью сканера мелких животных G8 PET-CT (PerkinElmer). Для проверки анти-CD4 scFv с фрагментами ПЭГ разного размера и без них изображения получали каждый час в течение первых 24 часов. Получение изображений для ПЭТ и КТ выполнялось в течение 10 мин и 1,5 мин соответственно. Для экспериментов по блокированию мышам C57BL/6J вводили 10 мг/кг немеченого scFv против CD4 (10 кДа ПЭГ) за 1 ч до инъекции 89 Zr-меченого scFv против CD4 (10 кДа ПЭГ). Изображения были обработаны с использованием программного обеспечения для реконструкции изображений производителя.Для дальнейшего анализа и количественной оценки данные были импортированы в программное обеспечение VivoQuant (Invicro). Значения сигнала ПЭТ выражали как процент введенной дозы радиоактивности на грамм. Области интереса были установлены с использованием наложений КТ.

Эксперименты по переносу клеток

Суспензии одиночных клеток CD4 + Т-клеток (от мышей-доноров OT-II) и CD8 + Т-клеток (от мышей-доноров OT-I) получали из селезенки и лимфатических узлов с использованием Наивный набор для выделения Т-клеток CD4 + и набор для выделения Т-клеток CD8a + соответственно в соответствии с инструкциями производителя (Miltenyi Biotec).Чистота выделенных клеток составляла >95% по данным цитофлуориметрии. Объединенные клетки промывали и ресуспендировали в PBS с последующей ретроорбитальной инъекцией 2×10 6 клеток CD4 + и/или CD8a + реципиентам RAG1 -/- . На 1-й день после переноса клеток мышам подкожно вводили 100 мкг куриного OVA (Sigma-Aldrich), эмульгированного в CFA (соотношение 1:1). инъекция в загривок. Иммунизированные мыши получали 50 мкКи (1850 кБк) радиоактивно меченого анти-CD4 scFv или анти-CD8 VHH путем ретроорбитальной инъекции на 4 и 11 дни.Затем на 5-й и 12-й дни были получены изображения ПЭТ-КТ (рис. 3А).

Модели меланомы

Исследования заражения опухолью проводили с использованием клеток меланомы B16 (Американская коллекция типовых культур) и мышиных клеток меланомы B16-OVA. Клетки меланомы В16 поддерживали в среде DMEM с добавлением 10% термоинактивированной FBS и 100 ЕД/мл пенициллина/стрептомицина. Клетки меланомы B16-OVA культивировали в среде RPMI 1640 с добавлением 10% термоинактивированной FBS, 100 ЕД/мл пенициллина/стрептомицина, 2 мМ/л глутамина, МЕМ заменимых аминокислот, 1 мМ/л пирувата натрия и 50 мМ/л. 2-МЕ.Самок мышей C57BL/6J инокулировали подкожно. с 5 × 10 5 клеток меланомы B16 в правом боку, что привело к пальпируемым опухолям примерно на 8-й день. Размер опухоли измеряли каждые 3 дня штангенциркулем. Для отслеживания CD4 + и CD8 + Т-клеток мышам с опухолями ретроорбитально вводили ~50 мкКи (1850 кБк) радиоактивно меченого анти-CD4 scFv или анти-CD8 VHH на 2, 5, 9 и 12, с последующим получением изображений ПЭТ-КТ на следующий день после инъекции радиофармпрепарата (рис.4А). Для модели меланомы B16-OVA мышам RAG1 -/- инокулировали 5 × 10 5 клеток в день 0 с последующим ретроорбитальным переносом 2 × 10 6 CD4 + (OT-II). ) и/или клетки CD8a + (OT-I) в 1-й день. На 2-й день мышей примировали 100 мкг OVA с последующим отслеживанием иммунных клеток с помощью иммуно-ПЭТ на 5-й и 12-й дни (рис. 5А). .

Результаты

Стратегия модификации scFv

Наша стратегия была сосредоточена на использовании scFv против CD4 в качестве моновалентного визуализирующего агента.Моновалентность должна не только снижать возможность перекрестного связывания молекулы-мишени на поверхности клетки, но и давать агент меньшего размера, чем используемые в настоящее время диатела. По сравнению с интактным анти-CD4 Ig, меньший размер scFv должен ускорить выведение из кровотока и, возможно, улучшить проникновение в ткани, что является желательным свойством визуализирующего агента (21). Соответственно, мы сконструировали scFv против CD4 из опубликованных последовательностей V H и V L для мышиных анти-CD4 (клон GK 1.5) (рис. 1А) (18) (таблица I). Рекомбинантно экспрессированный scFv очищали с выходом 2–3 мг/л культуры E. coli . ЖХ-МС и ДСН-ПААГ очищенного продукта подтвердили ожидаемую молекулярную массу ~27 кДа (рис. 1В, 1С).

РИСУНОК 1.

Характеристика анти-CD4 scFv. ( A ) Схематическое изображение конструкции scFv. ( B ) ЖХ-МС и ( C ) SDS-PAGE показывают характеристики очищенного анти-CD4 scFv. ( D ) Схема сайт-специфической конъюгации scFv с флуоресцеином с использованием сортазы.( E ) Характеристика меченого флуоресцеином анти-CD4 scFv. SDS-PAGE подтверждает идентичность конъюгированных конструкций (дорожка 1, маркер; дорожка 2, анти-CD4 scFv; дорожка 3, флуоресцеин анти-CD4 scFv). ( F ) FACS-анализ спленоцитов, гейтированных по CD45 + CD19 CD3 + с включением и без включения коммерческого анти-CD4 (клон RM4-5), подтверждающий, что анти-CD4 scFv специфически окрашивает CD4 + кл.

Мы избегали стратегий химической модификации на основе N -гидроксисукцинимида или малеимида, чтобы предотвратить нежелательные побочные реакции (22, 23).Вместо этого мы выбрали ферментативную установку выбранного заместителя для конкретного сайта. С этой целью мы широко использовали сортазу в качестве инструмента для химико-ферментативной маркировки (14, 24). Сортаза распознает мотив LPXTG и расщепляет С-концевой остаток Thr с одновременным образованием промежуточного субстрата тиоэфирного фермента. Затем это разрешается добавлением нуклеофила, обычно пептида с N-концевым остатком Gly, к которому может быть присоединена любая представляющая интерес полезная нагрузка. Мы клонировали анти-CD4 scFv таким образом, чтобы он нес С-концевое удлинение с последовательностью распознавания сортазы, за которой следовала метка (His) 6 , чтобы обеспечить аффинную очистку на основе хелата металла (фиг.1Д). Этот scFv хорошо экспрессировался, легко очищался, затем метился флуорофорами или другими выбранными модификациями. Поскольку сортаза и непрореагировавший scFv содержат His-метку, адсорбция реакционной смеси на Ni-NTA-агарозе отделяет желаемый (несвязанный) продукт от исходного материала. Затем на стадии простой эксклюзионной хроматографии желаемый модифицированный анти-CD4 scFv отделяют от клеток с более низкой молекулярной массой. нуклеофила, используемого в реакции в избытке. Анти-CD4 scFv сайт-специфически метили флуоресцеином с использованием сортазы (фиг.1Д). SDS-PAGE подтвердил флуоресцеиновое мечение scFv (фиг. 1E). Используя нефракционированные спленоциты в качестве мишени, флуоресцентно меченный scFv декорировал CD4 + Т-клетки, как было измерено с помощью цитофлуориметрии (фиг. 1F). scFv эффективно конкурировал за связывание с mAb RM4-5, подтверждая, что эта конструкция scFv сохраняла свою надлежащую специфичность при мечении на С-конце (фиг. 1F).

Дизайн линкера и ПЭТ-визуализация

Для установки ПЭТ-изотопов мы использовали линкеры, представленные на диаграмме (рис.2А в качестве нуклеофилов для сортазной реакции, с ДФО в качестве хелатора для установки 89 Zr и спейсеров ПЭГ 10 и 20 кДа, где применимо. Мы произвели три версии меченого scFv, одну без ПЭГ, одну модифицированную 10-кДа ПЭГ и одну модифицированную 20-кДа ПЭГ. Установка несущих ПЭГ линкеров проходила эффективно, при этом в конечном продукте сохранялось лишь минимальное количество немодифицированных scFv (фиг. 2B), и маловероятно, что они будут конкурировать с пегилированными scFv за связывание. Визуализирующие агенты вводили i.v. через ретроорбитальное сплетение, и изображения получали ежечасно в течение первых 24 часов. Репрезентативные изображения для 1 ч, 2 ч, 4 ч, 8 ч, 16 ч и 24 ч показаны на (рис. 2C; видео, демонстрирующие трехмерную (3D) визуализацию, приведены в дополнительном видео 1.

РИСУНОК 2.

Характеристика меченого Zr анти-CD4 scFv 89 ( A ) Схематическое изображение мечения 89 Zr и пегилирования анти-CD4 scFv ( B ) SDS-PAGE подтверждает модификацию анти-CD4 scFv с различными фрагментами ПЭГ (дорожка 1, маркер; дорожка 2, анти-CD4 scFv без ПЭГ; дорожка 3, анти-CD4 scFv 10-кДа ПЭГ; дорожка 4, анти-CD4 scFv 20-кДа ПЭГ).( C ) 89 Меченные Zr анти-CD4 scFv вводили мышам дикого типа, и изображения получали через 1, 2, 4, 8, 16 и 24 часа после инъекции. (C 1 )–(C 6 ) представляют результаты, полученные с анти-CD4 scFv без ПЭГ, (C 7 )–(C 12 ) представляют результаты, полученные с анти-CD4 scFv 10-кДа PEG и (C 13 )–(C 18 ) представляют результаты, полученные с анти-CD4 scFv 20-kDa PEG. (C 19 )–(C 21 ) демонстрируют специфичность 89 Zr-меченого анти-CD4 scFv 10-кДа ПЭГ в диком типе (C19), CD4-блокированном (C20) и RAG1 — /− (C21) мышей.( D ) Биораспределение ex vivo 89 Zr-меченого анти-CD4 scFv ПЭГ 10 кДа от мышей дикого типа (C19), CD4-блокированных (C20) и RAG1 -/- (C21) мышей ( n = 3 мыши на группу). Стрелка указывает на вторичные лимфоидные органы. ALN, подмышечный лимфатический узел; CLN, шейный лимфатический узел; ILN, паховый лимфатический узел.

scFv в его непегилированной форме был обнаружен в кровотоке вскоре после инъекции, исчез из кровотока, а затем показал накопление в основном в печени и почках, где он сохранялся дольше всего.Трудно было визуализировать какие-либо лимфоидные органы (рис. 2C1–6). Как и ожидалось, версии, несущие фрагменты ПЭГ 10 кДа (рис. 2C7–12) и 20 кДа (рис. 2C13–18), демонстрировали повышенную стойкость в кровотоке после инъекции, особенно очевидную для пегилированного scFv 20 кДа. с заместителем ПЭГ 20 кДа, обеспечивающим более длительный период полувыведения из кровотока. ПЭТ-визуализация в более поздние моменты времени показала прогрессирующую потерю метки из кровотока. Однако через 8 ч и 20 ч после инъекции как 10-кДа, так и 20-кДа пэгилированные scFv показали наличие метки во вторичных лимфоидных органах с улучшенным соотношением сигнал/шум ПЭТ.Предварительное введение немеченого анти-CD4 scFv (10-кДа ПЭГ) полностью блокировало накопление визуализирующего агента во вторичных лимфоидных органах (рис. 2С20). Биораспределение ex vivo анти-CD4 scFv (10-кДа ПЭГ) через 24 часа после инъекции мышам C57BL/6J дикого типа, мышам C57BL/6J с блокировкой CD4 и мышам RAG1 -/- показало наличие метки в вторичные лимфоидные органы только у мышей дикого типа, демонстрирующие CD4-специфичность in vivo (рис. 2C19–21, 2D). Мы определили, что только минимальное количество метки сохранялось в почках через 1 неделю после введения меченого анти-CD4 scFv, при этом метка не обнаруживалась во вторичных лимфоидных органах (Дополнительное видео 2). Генерация соответствующего агента визуализации ПЭГилированного CD8 на основе VHH, который мы использовали для сравнения, была описана (16) и визуализирует Т-клетки CD8 + в ожидаемых местах. Что касается качества изображения ПЭТ, анти-CD8 VHH превосходит анти-CD4 scFv во всех протестированных условиях (данные не показаны).

Перенос лимфоцитов в RAG1

-/- реципиента

Мы использовали трансгенных мышей TCR в качестве источника Т-клеток с определенной антигенной специфичностью. Спленоциты от OVA-специфических трансгенных мышей OT-I и OT-II TCR очищали для получения чистых популяций Т-клеток CD8 + и CD4 + соответственно.Они были перенесены в реципиентов RAG1 -/- , у которых отсутствуют все В- и Т-клетки, что позволило бы нам изучить динамику приживления Т-клеток после адоптивной переносной терапии в отсутствие стартовой, резидентной популяции CD4-хозяина. + и CD8 + Т-клетки (25, 26). Следовательно, наблюдаемый сигнал ПЭТ обязательно будет исходить от перенесенных клеток. Мышей-реципиентов затем визуализировали с помощью иммуно-ПЭТ. Слабый или отсутствующий специфический сигнал ПЭТ был обнаружен через 5 и 12 дней после переноса (рис.3В1–4). Только когда мышей иммунизировали OVA в CFA, Т-клетки OT-I и OT-II сохранялись во вторичных лимфоидных органах, что визуализировалось через 5 дней после иммунизации (Fig. 3B5-8). В отсутствие иммунизации совместный перенос Т-клеток ОТ-I и ОТ-II не показал улучшения персистенции ни CD4 + , ни CD8 + Т-клеток (рис. 3B9-12). У мышей, иммунизированных OVA в CFA, улучшилась персистенция как CD4 + , так и CD8 + Т-клеток (рис. 3B13-16). В частности, для Т-клеток CD8 + котрансфер Т-клеток CD4 + приводил к заметному накоплению Т-клеток CD8 + на 12-й день в месте инъекции, предположительно из-за локальных отложений Ag (рис.3В8, 16). На 12-й день для CD4 + Т-клеток такого накопления не наблюдалось или наблюдалось незначительное, что мы связываем с меньшей чувствительностью агента визуализации CD4 (рис. 3B6, 14). Репрезентативные видео 3D-рендеринга приведены в дополнительном видео 3.

РИСУНОК 3.

Иммуно-ПЭТ против CD4 и -CD8 обнаруживает клетки OT-II и OT-I, соответственно, у хозяина с иммунодефицитом. Клетки OT-II и OT-I переносили мышам RAG1 -/- и получали OVA в CFA с последующим отслеживанием перенесенных клеток с помощью ПЭТ.( A ) Схема показывает план эксперимента. ( B ) Отслеживание CD4 + и CD8 + Т-клеток на 5 и 12 день после переноса (две мыши на группу). (B 1 )–(B 8 ) показывают мышей, которым вводили только клетки OT-II или OT-I. (B 9 )–(B 16 ) показывают мышей, которым вводили как клетки OT-II, так и клетки OT-I. Стойкость как CD4 + , так и CD8 + Т-клеток улучшалась после иммунизации (B5–B8 и B13–B16) по сравнению с неиммунизированными мышами (B1–B4 и B9–B12).Схема создана с помощью BioRender. com.

ПЭТ-визуализация CD4

+ и CD8 + Т-клеток у мышей с опухолями

Мы инъецировали мышам C57BL/6J 5 × 10 5 клеток высокоагрессивной линии меланомы B16 в правый бок. Опухоли стали пальпируемыми примерно через 8 дней после инокуляции. Мы визуализировали CD4 + и CD8 + Т-клетки на 3, 6, 10 и 13 дни после инокуляции. На 3-й и 6-й день распределение Т-клеток CD4 + и CD8 + было сравнимо с таковым у контрольных животных, без видимых признаков локализации лимфоцитов в ожидаемых участках опухоли (место инъекции). ) (Рисунок.4Б1–2, 5–6). Изображения, полученные через 10 дней, показали явные признаки опухоли с помощью КТ и признаки лимфоцитарной инфильтрации как CD4 + , так и CD8 + Т-клетками, что свидетельствует о поликлональном ответе, который, тем не менее, не может контролировать опухоль (рис. 4B3, 7). На 13-й день размер опухоли увеличился с усилением инфильтрации как CD4 + , так и CD8 + Т-клеток (рис. 4B4, 8). Однако инфильтрация была менее очевидной для Т-клеток CD4 + , чем для Т-клеток CD8 + .Распределение Т-клеток CD4 + и CD8 + по опухоли было неоднородным и представляло собой несколько пятнистое изображение (рис. 4Б, 4В). Репрезентативные видео 3D-рендеринга приведены в дополнительном видео 4A.

РИСУНОК 4.

Продольный мониторинг CD4 + и CD8 + Т-клеток у хозяина дикого типа с опухолью. ( A ) Мышей C57BL/6J инокулировали клетками меланомы B16. Изображения ПЭТ были получены, как показано на схеме. ( B ) Иммуно-ПЭТ CD4 + и CD8 + Т-клеток на 3, 6, 10 и 13 дни после инокуляции клеток меланомы (2 мыши в группе).(B 1 4 ) Отслеживание CD4 + Т-клеток; (B 5 8 ) CD8 + Т-клетки. ( C ) Биораспределение ex vivo 89 Zr-меченого анти-CD4 scFv 10-кДа ПЭГ и анти-CD8 VHH 20-кДа ПЭГ в хозяине дикого типа, несущем опухоль. ( D ) FACS-анализ дренированного пахового лимфатического узла, собранного на 10 и 13 день, показывает, что количество лимфоцитов увеличивалось по мере роста опухоли, что также наблюдалось с помощью иммуно-ПЭТ. Схема создана с помощью BioRender.ком. ЦНИЛН; контралатеральный неопухолевой паховый лимфатический узел, TDILN; опухоль дренирует паховый лимфатический узел.

Затем мы инокулировали мышей RAG1 -/- с помощью B16-OVA, варианта линии меланомы B16, экспрессирующей фрагмент OVA, который содержит эпитопы, распознаваемые трансгенными мышами OT-I и OT-II TCR. Затем этим мышам вводили Т-клетки OT-I, Т-клетки OT-II или и то, и другое. Активацию перенесенных Т-клеток осуществляли путем иммунизации после переноса с помощью OVA в CFA в указанные моменты времени (фиг. 5А).На 5-й день опухоль не пальпировалась, и у мышей без иммунизации был обнаружен небольшой или отсутствующий специфический сигнал ПЭТ (рис. 5B1–4, 9–12). Напротив, иммунизация мышей увеличивала количество Т-клеток CD4 + и CD8 + на 5-й день во вторичных лимфоидных органах и сопровождалась усилением инфильтрации Т-клеток в опухоли на 12-й день (рис. 5B5–8). . Коперенос ОТ-I и ОТ-II, а также иммунизация увеличивали количество Т-клеток как во вторичных лимфоидных органах, так и в опухолях (рис.5В13–16). Репрезентативные видео 3D-рендеринга показаны в дополнительном видео 4B.

РИСУНОК 5.

Динамика CD4 + и CD8 + Т-клеток у опухоленосных иммунодефицитных реципиентов. Мышам RAG1 -/- инокулировали клетки меланомы B16-OVA с последующим переносом клеток OT-II и/или OT-I. Мыши получали OVA в CFA, как указано. ( A ) Изображения ПЭТ были получены, как показано на схеме. ( B ) Отслеживание CD4 + и CD8 + Т-клеток на 5 и 12 день после инокуляции клеток меланомы B16-OVA (2 мыши на группу).(B 1 )–(B 8 ) показывают мышей, которым вводили только клетки OT-II или OT-I. (B 9 )–(B 16 ) показаны мыши, которым вводили как клетки OT-II, так и клетки OT-I. Пролиферация и опухолевая инфильтрация как CD4 + , так и CD8 + Т-клеток улучшились в присутствии иммунизации (B5–8 и B13–16) по сравнению с неиммунизированными мышами (B1–4 и B9–12).

Обсуждение

Основная цель этой работы состояла в том, чтобы показать, что установленные моноклональные антитела могут быть сконструированы для получения моновалентных фрагментов scFv, которые подходят в качестве агента визуализации ПЭТ.ПЭТ — это неинвазивный метод визуализации, который позволяет проводить продольный мониторинг распределения визуализирующего агента по всему телу с миллиметровым разрешением (2, 27). Сообщалось о клиническом использовании в ПЭТ и однофотонной эмиссионной КТ таких меньших форматов производных Ig как для диател (молекулярная масса ~ 50 кДа), так и для нанотел (молекулярная масса ~ 15 кДа) (28–30). Диатела обладают неотъемлемым преимуществом бивалентности, но за пределами приложений визуализации они не были так широко распространены, как другие форматы Ig (1, 17, 31).Нанотела, помеченные 18 F, дали приемлемые результаты в доклинических моделях (32, 33), но диапазон доступных специфичностей менее широк, чем у обычных Ig. Таким образом, преобразование существующих mAb в scFv с использованием хорошо зарекомендовавших себя методов может значительно расширить репертуар визуализирующих агентов. В нашем исследовании пегилированный 89 Zr-меченый анти-CD4 scFv продемонстрировал специфическое нацеливание как на эндогенные, так и на инфильтрирующие опухоль CD4 + Т-клетки in vivo, как показано с помощью иммуно-ПЭТ.Различные стратегии (радио) мечения, такие как выбор хелатора металла, радиоизотопа, химии конъюгации и пептидных линкеров, могут изменить фармакокинетику радиоактивно меченых фрагментов Ат (31, 34). Сайт-специфическая конъюгация с использованием сортазы А на С-конце scFv позволяет избежать осложнений, связанных со стратегиями тиол-специфического радиоактивного мечения. Модифицированный scFv сохраняет специфичность в отношении антигена-мишени. ПЭТ может страдать от эффекта частичного объема при обнаружении активности в небольших интересующих областях, таких как лимфатические узлы, из-за разрешения сканера (35).Даже с учетом этого ограничения мы продемонстрировали, что с помощью иммуно-ПЭТ анти-CD4 scFv может обнаруживать вторичные лимфоидные органы у мышей, в том числе в модели опухоли меланомы.

Мы смогли неинвазивно отслеживать размножение перенесенных CD4 + и CD8 + Т-клеток в модели иммунодефицитных мышей. Возможно, неудивительно, что предшествующая иммунизация соответствующим антигеном резко улучшила интенсивность наблюдаемого сигнала, связанного с экспансией этих антиген-специфических лимфоцитов.Визуализация Т-клеток путем прямого радиоактивного мечения ex vivo часто усложняет их обнаружение из-за периода полураспада используемого радионуклида, разбавления зонда и радиотоксичности (36, 37). Использование репортерного гена может обойти осложнения, связанные с прямым радиоактивным мечением клеток ex vivo (38, 39), но требует очевидных генетических манипуляций и может также страдать от высокого фонового сигнала в органах элиминации (40, 41). Наиболее часто используемые метаболические зонды для визуализации ПЭТ, такие как [ 18 F]FDG и [ 18 F]FAC, не обладают специфичностью для обнаружения инфильтрирующих иммунных клеток (42).

Мы также исследовали распределение CD4 + и CD8 + Т-клеток в условиях противоопухолевого ответа на примере меланомы B16 и ее OVA-экспрессирующего варианта. Иммуно-ПЭТ может обнаруживать инфильтрирующие лимфоциты, как только опухоль становится пальпируемой, но, по-видимому, не раньше. Ранее мы обсуждали чувствительность иммуно-ПЭТ; в то время как вторичные лимфоидные органы содержат лимфоциты в количестве и плотности, которые легко позволяют визуализировать с помощью иммуно-ПЭТ, более диффузное распределение тканей остается проблемой (16, 43) для иммуно-ПЭТ.В отличие от иммуногистохимии, которая дает разрешение на одноклеточном и даже субклеточном уровне, ПЭТ этого не делает. Более того, позитроны не бывают разных «цветов» или уровней энергии, которые позволили бы получить эквивалент мультиспектральной визуализации. Несмотря на эти ограничения, иммуно-ПЭТ в настоящее время является единственным неинвазивным методом, который может визуализировать распределение типов клеток, таких как лимфоциты и другие иммунные клетки, у живой мыши без необходимости каких-либо генетических модификаций популяции клеток-мишеней. Доступность соответствующего визуализирующего агента может выявить аспекты распределения распознанных мишеней (мишеней), которые могли ускользнуть от обнаружения другими средствами. Показательным примером является экспрессия PD-L1 на бурой жировой ткани, обнаруженная с помощью ПЭТ (44). Более ранние исследования показали потенциальное использование визуализации распределения лимфоцитов с помощью иммуно-ПЭТ в качестве возможного биомаркера ответа на иммунотерапию (1, 16, 43, 45). В настоящее время возможна даже идентификация с помощью иммуно-ПЭТ антиген-специфических CD8 + Т-клеток (20).

Эти результаты представляют практический интерес по двум основным причинам. Во-первых, для АТ, используемых в клинической практике, не всегда легко получить точную информацию о распределении целевых АГ, и в основном она основывается на инвазивных методах, таких как иммуногистохимия, на образцах, полученных путем биопсии или хирургической резекции. Динамика присутствия и распределения таких АГ в тканях может предоставить важные и, возможно, полезные данные для руководства терапией, например, в случае блокирующих контрольные точки АТ при лечении рака (1, 16, 43). Путем преобразования клинически полезных Ab в scFv и соответствующей модификации их для иммуно-ПЭТ такая информация может быть получена неинвазивно.

Во-вторых, нанотела как наименьшие фрагменты Ig, сохраняющие свойства связывания Ag, превосходны в качестве строительных блоков для агентов визуализации ПЭТ (30, 46), но создание таких реагентов может занять много времени, может потребовать гуманизации и не всегда может быть возможным для представляющих интерес АГ. На сегодняшний день не сообщалось о нанотелах против мышиного CD4.Возможность использовать богатую коллекцию существующих mAb в качестве возможного источника визуализирующих агентов может оказаться мощной альтернативой, особенно в доклинических моделях и для разных видов.

Раскрытие информации

У авторов нет финансового конфликта интересов.

Благодарности

Мы благодарим Стивена К. Колифрата за помощь в проведении экспериментов на животных и Николаса МакКола, Джастина Ливенсе, Райана Александра и Томаса Баллигана за поддержку и полезные обсуждения.

Сноски

  • Эта работа была поддержана грантом 1R01CA255216-01 Национального института здравоохранения (NIH). А.И. был поддержан Норвежским онкологическим обществом (Проект 198164) и Арктическим университетом Норвегии UiT, которые предоставили зарубежный грант. Н.П. поддержало Общество стипендиатов Гарвардского университета. А.В.В. был поддержан постдокторской стипендией Арнольда О. Бекмана. Р.В.К. была поддержана стипендией Ирвингтонского научно-исследовательского института рака.MR был поддержан грантом NIH K22CA226040 и грантом фундаментальных исследований Фонда инновационных исследований Института рака Дана-Фарбер.

  • Хидде Л. Плоэг — почетный член AAI.

  • Электронная версия этой статьи содержит дополнительные материалы.

  • Сокращения, используемые в этой статье

    CT
    Компьютерная томография
    Трехмерный
    DFO
    LC-MS
    LC-MS
    Жидкая хроматография-масс-спектрометрия
    PEG
    POGLEETYLELELEL
    PET
    POSITRONE
    scFv
    одноцепочечный вариабельный фрагмент
    VHH
    вариабельный фрагмент Ab, содержащий только Н-цепь
  • Принято 21 июня 2021 г.
  • Copyright © 2021 Американской ассоциации иммунологов, Inc.

    Спасибо за ваш запрос.

    У нас есть ряд продуктов, которые сопоставимы с продуктами из списка, который вы нам прислали. Для будущих запросов я хотел бы направить вас к поисковой системе на нашем веб-сайте (www.abcam.com).

    Введите название белка в поле поиска в верхней части главной страницы.Будет создан список продуктов, который можно уточнить с помощью фильтров в левой части страницы. Использование этих фильтров поможет вам идентифицировать продукты, которые были протестированы в областях применения и интересующих вас видах.

    Ниже приведен список кодов продуктов и ссылки на соответствующие спецификации: (триметил-K4) антитело [mAbcam1012] — класс ChIP)

    https://www.abcam. com/Histone-h4-tri-methyl-K4-antibody-mAbcam1012-ChIP-Grade-ab1012.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Histone-h4-tri-methyl-K4-antibody-mAbcam1012-ChIP-Grade-ab1012.html).

    ab12209 (антитело против гистона h4 (триметил K4) [mAbcam12209] — класс ChIP) -ab12209.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Histone-h4-tri-methyl-K4-antibody-mAbcam12209-ChIP-Grade-ab12209.html).

    ab6002 (антитело против гистона h4 (триметил K27) [mAbcam 6002] – класс ChIP)

    https://www.abcam.com/Histone-h4-tri-methyl-K27-antibody-mAbcam-6002-ChIP-Grade-ab6002.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Histone-h4-tri-methyl -K27-антитело-mAbcam-6002-ChIP-Grade-ab6002.html).

    ab124462 (антитело Anti-Flag Tag)

    https://www.abcam.com/DDDDK-tag-antibody-Equivalent-to-FLAG-antibodies-from-Sigma-ab124462.html (или используйте следующее: https ://www.abcam.com/DDDDK-tag-antibody-Equivalent-to-FLAG-antibodies-from-Sigma-ab124462.html).

    ab6939 (козьи поликлональные вторичные антитела к IgG кролика — H&L (Cy3®), предварительно адсорбированные)

    https://www. abcam.com/Goat-Rabbit-IgG-HL-Cy3—preadsorbed-ab6939.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Goat-Rabbit-IgG-HL-Cy3—preadsorbed-ab6939 .html).

    ab96899 (козьи поликлональные вторичные антитела к IgG кролика — H&L (DyLight® 488), предварительно адсорбированные) .html (или используйте следующий: https://www.abcam.com/Goat-Rabbit-IgG-HL-DyLight-488-preadsorbed-ab96899.html).

    ab96919 (вторичное антитело ослиного антикроличьего IgG H&L (DyLight® 488))

    https://www.abcam.com/Donkey-Rabbit-IgG-HL-DyLight-488-preadsorbed-ab96919.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Donkey-Rabbit-IgG-HL-DyLight-488-preadsorbed -ab96919.html).

    ab96879 (козьи поликлональные вторичные антитела к IgG мыши — H&L (DyLight® 488), предварительно адсорбированные)

    .html (или используйте следующий: https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG-HL-DyLight-488-preadsorbed-ab96879.html).

    ab96871 (вторичное антитело козы против мышиных IgG H&L (DyLight® 488))

    https://www. abcam.com/Goat-Mouse-IgG-HL-DyLight-488-ab96871.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG-HL-DyLight-488-ab96871.html ).

    ab97265 (вторичное антитело козы против мышиного IgG Fc (HRP))

    https://www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG-Fc-HRP-ab97265.html /www.abcam.com/Goat-Mouse-IgG-Fc-HRP-ab97265.html).

    ab7481 (козья сыворотка)

    https://www.abcam.com/Normal-Goat-Serum-ab7481.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Normal-Goat-Serum-ab7481.html).

    ab7487 (Кроличья сыворотка (стерильная)) -Rabbit-Serum-Sterile-ab7487.html).

    ab46666 (оцДНК спермы сельди)

    https://www.abcam.com/Herring-sperm-ssDNA-ab46666.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Herring-sperm-ssDNA -ab46666.html).

    ab52579 (белок рибонуклеазы А (активный))

    https://www.abcam.com/Natural-cow-Ribonuclease-A-protein-ab52579.html (или используйте следующую ссылку: https://www.abcam.com/Natural-cow-Ribonuclease-A-protein-ab52579. html).

    ab73430 (белок ДНКазы I (активный))

    https://www.abcam.com/Recombinant-human-DNase-I-protein-Active-ab73430.html (или используйте следующее: https://www. abcam.com/Recombinant-human-DNase-I-protein-Active-ab73430.html).

    ab64220 (протеиназа К)

    https://www.abcam.com/Proteinase-K-Antigen-Retrieval-Solution-ab64220.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Proteinase-K-Antigen-Retrieval-Solution-ab64220.html).

    ab65621 (коктейль с ингибитором протеазы)

    https://www.abcam.com/Protease-Inhibitor-Cocktail-ab65621.html (или используйте следующее: https://www.abcam.com/Protease-Inhibitor-Cocktail -ab65621.html).

    ab116028 (Prism Ultra Protein Ladder (10-245 кДа)) используйте следующее: https://www.abcam.com/Prestained-Protein-Ladder-Broad-молекулярно-вес-10-245-kDa-ab116028.html).

    Надеюсь, эта информация будет вам полезна. Если у вас есть конкретные вопросы о продуктах, найденных во время поиска, пожалуйста, не стесняйтесь обращаться ко мне.

    Подробнее

    Набор инструментов вторичных нанотел против мышиных и кроличьих IgG | Журнал клеточной биологии

    Мы иммунизировали двух альпак отдельно поликлональными мышиными или кроличьими IgG и использовали химически биотинилированные мышиные mAb определенных подклассов, а также кроличьи IgG для выбора нанотел из полученных иммунных библиотек с помощью фагового дисплея.Первые результаты с первоначально полученными анти-IgG-нанотелами были довольно неутешительными: мы наблюдали тусклые и зашумленные сигналы в иммунофлуоресценции, а также в Вестерн-блоте. Мы рассудили, что повышение аффинности и специфичности может привести к получению улучшенных реагентов, и поэтому повторно иммунизировали животных после годовой паузы. Для этого мы использовали IgG, предварительно связанные с мультивалентными антигенами в виде частиц, которые, как ожидается, будут обеспечивать сильные эпитопы Т-хелперных клеток. Кроме того, мы увеличили строгость последующего отбора фагового дисплея, снизив концентрацию приманки до фемтомолярного диапазона, который должен не только сам по себе отбирать субнаномолярные связующие, но и привести отображаемые нанотела в прямую конкуренцию друг с другом, потому что количество молекул-приманок было до 1000 раз меньше, чем количество отображающих фагов.Наконец, мы выполнили созревание аффинности in vitro путем случайного мутагенеза и дальнейших раундов фагового дисплея, на этот раз также в сочетании с отбором вне нормы. Таким образом, мы получили большой набор антикроличьих и антимышиных нанотел IgG (рис. 1а).

    Все нанотела были тщательно охарактеризованы в отношении специфичности подкласса, расположения эпитопа на Fab- или Fc-фрагменте и перекрестной реактивности с IgG других видов (рис. 1b и S1a).Их полные белковые последовательности перечислены в таблице S1, а плазмиды для бактериальной экспрессии выбранных нанотел также будут распространяться Addgene (ID 104157–104164). Примечательно, что мы идентифицировали нанотела против всех четырех подклассов IgG мыши и единственного подкласса IgG кролика. Поразительно, но многие нанотела против мышиного IgG нацелены на IgG1, который представляет собой наиболее распространенный подкласс коммерчески доступных мышиных mAb (∼62–64%), за которым следуют IgG2a (∼22–24%) и менее распространенный IgG2b (∼13% ) и IgG3 (∼1–2%).Поскольку подавляющее большинство (∼99%) мышиных mAb обладают легкой цепью κ, нанотела против κ-цепи обещали быть наиболее широко полезными инструментами, и поэтому мы активно отбирали такие связывающие вещества путем замены подкласса тяжелой цепи IgG во время последовательного отбора. раунды. Для идентификации связывающих веществ, нацеленных на редкую λ-цепь, нам пришлось предварительно истощить иммунную библиотеку нанотел связывающими тяжелыми цепями и κ-цепями. Некоторые из идентифицированных нанотел имеют смешанную специфичность, например, несколько Fab-связывателей мыши нацелены на поверхность раздела между легкой цепью κ и тяжелой цепью IgG1 или IgG2a. Большинство нанотел против мышиных IgG специфичны исключительно для мышей, тогда как некоторые дополнительно реагируют перекрестно с крысиными IgG (рис. S1a). Нанотело TP897 против кроличьего IgG также эффективно распознает IgG морской свинки. Все нанотела были получены путем цитоплазматической экспрессии в Escherichia coli , в основном с N-концевой His-NEDD8-меткой для очистки с помощью аффинного захвата хелата Ni (II) и протеолитического высвобождения (Frey and Görlich, 2014). Затем они были снабжены эктопическими цистеинами для последующих реакций мечения малеимидом (Pleiner et al., 2015). Без дальнейшей оптимизации мы обычно получали выход 15 мг/л бактериальной культуры, чего уже достаточно для миллиона иммунофлуоресцентных окрашиваний или 200 литров раствора для вестерн-блоттинга.

    Сначала мы оценили, являются ли нанотела анти-IgG специфичными и могут ли они очищать свои мишени IgG от их общего источника. Нанотела против кроличьего IgG TP896 и TP897 выделяли поликлональные кроличьи IgG из неочищенной кроличьей сыворотки с высокой специфичностью (рис. С1 б). Аналогичным образом, нанотела против мышиного IgG TP881 и TP885 могут очищать mAb IgG1 из супернатанта культуры клеток гибридомы (рис. S1c). Примечательно, что связанный с нанотелом IgG высвобождается в физиологических условиях с помощью расщепления протеазой SUMOStar (Pleiner et al., 2015). Основное достоинство этого подхода, возможно, заключается не в очистке IgG из сыворотки, а скорее в проведении иммуноаффинной очистки антигенов или антигенных комплексов, которые были предварительно связаны с первичными антителами. В отличие от традиционных ИП этот подход позволяет высвобождать очищенные комплексы в полностью нативных условиях.

Описание Специфика Target Формат Isotype клон Приложения Цитаты Тип продукта код Типы валидации

Вторичные антитела | Иммунореагенты

Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure
Неконъюгированный
Мышь CkxMu-003-D 2,0 мг 148 долларов. 84
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, ALP Conjugate
Щелочная фосфатаза
Мышь CkxMu-003-DALP 1,0 мг 237 долларов.04
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, биотиновый конъюгат, минимум x w/человеческий или кроличий IgG/сывороточные белки
Биотин (NHS-LC)
Мышь CkxMu-003-EBIO 0,5 мг 135 долларов. 61
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®550 Conjugate
DyLight® 550 (Ex = 562 нм; Em = 576 нм)
Мышь CkxMu-003-D550NHSX 1,0 мг 231 доллар.52
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат DyLight®550, мин. x вес/IgG человека или кролика и белки сыворотки
DyLight® 550 (Ex = 562 нм; Em = 576 нм)
Мышь CkxMu-003-E550NHSX 0.5 мг 153,25 $
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®594 Conjugate
DyLight® 594 (Ex = 593 нм; Em = 618 нм)
Мышь CkxMu-003-D594NHSX 1. 0 мг 231,52 $
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, HRP Conjugate
Пероксидаза хрена
Мышь CkxMu-003-DHRPX 1.0 мг 195,14 $
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат HRP, минимум x w/человеческий или кроличий IgG/сывороточные белки
Пероксидаза хрена
Мышь CkxMu-003-EHRPX 0. 5 мг $135,61
Куриные анти-мышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, мин. x с IgG человека или кролика/белки сыворотки
Неконъюгированный
Мышь CkxMu-003-E 0.5 мг 178,61 $
Куриные антимышиные IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат TRITC, мин. x вес/человеческий или кроличий IgG/сывороточные белки
Тетраметилродамин-5-изотиоцианат (ТРИТЦ) Amax = 550 нм; Emax = 570 нм
Мышь CkxMu-003-ERHOX 0. 5 мг 119,07 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure
Неконъюгированный
Мышь ДкксМу-003-D 2.0 мг 88,20 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, ALP Conjugate
Щелочная фосфатаза
Мышь ДкксМу-003-ДАЛП 1.0 мг 148,84 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, ALP Conjugate, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Щелочная фосфатаза
Мышь DkxMu-003-FALP 1. 0 мг 223,81 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, биотиновый конъюгат
Биотин (NHS-LC)
Мышь ДкксМу-003-ДБИО 2.0 мг 178,61 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, биотиновый конъюгат, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Биотин (NHS-LC)
Мышь ДкксМу-003-ФБИО 1. 0 мг 165,38 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат, FITC мин. x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Флуоресцеин-5-изотиоцианат (FITC) Amax = 494 нм; Emax = 518 нм
Мышь DkxMu-003-FFITC 1.0 мг 148,84 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®350 Conjugate
DyLight® 350 (Ex = 353 нм; Em = 432 нм)
Мышь DkxMu-003-D350NHSX 1. 0 мг 108,05 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®488 Conjugate
DyLight® 488 (Ex = 493 нм; Em = 518 нм)
Мышь DkxMu-003-D488NHSX 1.0 мг $99,22
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — конъюгат Affinity Pure, DyLight®488, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 488 (Ex = 493 нм; Em = 518 нм)
Мышь DkxMu-003-F488NHSX 1. 0 мг 195,14 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — конъюгат Affinity Pure, DyLight®550, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 550 (Ex = 562 нм; Em = 576 нм)
Мышь DkxMu-003-F550NHSX 1.0 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®594 Conjugate
DyLight® 594 (Ex = 593 нм; Em = 618 нм)
Мышь DkxMu-003-D594NHSX 1. 0 мг 108,05 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат DyLight®594, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 594 (Ex = 593 нм; Em = 618 нм)
Мышь DkxMu-003-F594NHSX 1.0 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®633 Conjugate
DyLight® 633 (Ex = 638 нм; Em = 658 нм)
Мышь DkxMu-003-D633NHSX 1. 0 мг 108,05 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат DyLight®633, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 633 (Ex = 638 нм; Em = 658 нм)
Мышь DkxMu-003-F633NHSX 1.0 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®650 Conjugate
DyLight® 650 (Ex = 652 нм; Em = 672 нм)
Мышь DkxMu-003-D650NHSX 1. 0 мг 108,05 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, DyLight®800 Conjugate
DyLight® 800 (Ex = 770 нм; Em = 794 нм)
Мышь DkxMu-003-D800NHSX 1.0 мг 108,05 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат DyLight®800, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 800 (Ex = 770 нм; Em = 794 нм)
Мышь DkxMu-003-F800NHSX 1. 0 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат FITC
Флуоресцеин-5-изотиоцианат (FITC) Amax = 494 нм; Emax = 518 нм
Мышь DkxMu-003-DFITC 2.0 мг 148,84 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, HRP Conjugate
Пероксидаза хрена
Мышь DkxMu-003-DHRPX 1.0 мг $101,43
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат HRP, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Пероксидаза хрена
Мышь DkxMu-003-FHRPX 1. 0 мг 195,14 $
Ослиный анти-мышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Неконъюгированный
Мышь ДкксМу-003-Ф 2.0 мг 119,07 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, TRITC Conjugate
Тетраметилродамин-5-изотиоцианат (ТРИТЦ) Amax = 550 нм; Emax = 570 нм
Мышь ДкксМу-003-ДРХОКС 1. 0 мг 90,40 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат TRITC, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Тетраметилродамин-5-изотиоцианат (ТРИТЦ) Amax = 550 нм; Emax = 570 нм
Мышь DkxMu-003-FRHOX 1.0 мг 148,84 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2
Неконъюгированный
Мышь ДкксМу-003-G 1. 0 мг 143,33 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — F(ab)’2-фрагмент, конъюгат ALP, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Щелочная фосфатаза
Мышь DkxMu-003-LALP 0.5 мг 359,41 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — F(ab)’2-фрагмент, конъюгат биотина, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Биотин (NHS-LC)
Мышь ДкксМу-003-ЛБИО 0. 5 мг 263,50 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2, конъюгат DyLight®633
DyLight® 633 (Ex = 638 нм; Em = 658 нм)
Мышь DkxMu-003-G633NHSX 0.5 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Фрагмент F(ab)’2, конъюгат DyLight®633, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
DyLight® 633 (Ex = 638 нм; Em = 658 нм)
Мышь DkxMu-003-L633NHSX 0. 5 мг 340,67 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2, конъюгат DyLight®800
DyLight® 800 (Ex = 770 нм; Em = 794 нм)
Мышь DkxMu-003-G800NHSX 0.5 мг 214,99 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2, конъюгат FITC
Флуоресцеин-5-изотиоцианат (FITC) Amax = 494 нм; Emax = 518 нм
Мышь DkxMu-003-GFITC 0. 5 мг 119,07 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — F(ab)’2-фрагмент, конъюгат FITC, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Флуоресцеин-5-изотиоцианат (FITC) Amax = 494 нм; Emax = 518 нм
Мышь DkxMu-003-LFITC 0.5 мг 244,76 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2, конъюгат HRP
Пероксидаза хрена
Мышь DkxMu-003-GHRPX 0. 5 мг 159,86 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — F(ab)’2-фрагмент, конъюгат HRP, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Пероксидаза хрена
Мышь DkxMu-003-LHRPX 0.5 мг 263,50 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — Фрагмент F(ab)’2, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Неконъюгированный
Мышь ДкксМу-003-Л 0. 5 мг 130,10 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — фрагмент F(ab)’2, конъюгат TRITC
Тетраметилродамин-5-изотиоцианат (ТРИТЦ) Amax = 550 нм; Emax = 570 нм
Мышь DkxMu-003-GRHOX 0.5 мг 119,07 $
Ослиный антимышиный IgG (H&L) — F(ab)’2-фрагмент, конъюгат TRITC, минимум x с IgG крупного рогатого скота, курицы, козы, морской свинки, хомяка, лошади, человека, кролика, крысы или овцы
Тетраметилродамин-5-изотиоцианат (ТРИТЦ) Amax = 550 нм; Emax = 570 нм
Мышь DkxMu-003-LRHOX 0. 5 мг 244,76 $
Козий антимышиный IgE: SureLight™ R-PE
R-фикоэритрин (R-PE)
Мышь GtxMu-002-DPE 100 мкг 261 доллар.24
Козий антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure
Неконъюгированный
Мышь GtxMu-003-D 2,0 мг 59 долларов. 54
Козий антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, ALP Conjugate
Щелочная фосфатаза
Мышь GtxMu-003-DALP 1,0 мг 148 долларов.84
Козий антимышиный IgG (H&L) — Affinity Pure, конъюгат ALP, минимум x с IgG крупного рогатого скота, козы, человека, кролика или крысы
Щелочная фосфатаза
Мышь GtxMu-003-FALP 1,0 мг 195 долларов.

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован.