Как вывести мышей: Как избавиться от мышей в частном доме – блог интернет-магазина Порядок.ру

Метод спаривания

Разделение в клетках

1. Самок и самцов мышей получают и помещают в отдельные клетки, где они выращиваются.
2. За несколько дней до начала спаривания мышей-самцов будут содержать отдельно (по 1 мыши в клетке), а самок — в стаде (по 5 мышей в клетке).

Создание следующего поколения путем размножения

1. Помня о следующих моментах, самцов и самок мышей объединяют и спаривают.
   • Половая зрелость: как самцы, так и самки мышей достигают половой зрелости в возрасте 8 недель и могут спариваться и рожать.
   • Половой цикл: наблюдают за вульвой самки мыши, и когда она становится опухшей и красной (это показывает, что половой цикл находится в точке проэструса), ее выбирают для спаривания, и, таким образом, скорость размножения увеличивается.
     (Информацию об отеке вульвы см. на фото [проэструс] на этой странице)
   • Местный эффект: когда самку помещают в клетку с самцом мыши, скорость размножения увеличивается.
   • Количество мышей: на каждого самца мыши приходится от одной до двух самок.
   • Время: Вечером собираются вместе самцы и самки мышей.
     
2. На следующее утро наблюдают за женской вульвой, и если наблюдается вагинальная пробка, спаривание произошло.
   Поскольку вагинальная пробка отпадает к полудню, наблюдение необходимо проводить утром.
   Затем в журнал записывают информацию о самцах и самках мышей, которые должны стать родителями, и дату подтверждения вагинальной пробки.
3. Самки мышей, у которых подтверждена вагинальная пробка, содержатся вместе в одной клетке
4. За несколько дней до даты родов (через 20 дней после подтверждения вагинальной пробки) каждой мыши выдается отдельная клетка, и на клетку наносится сообщение, которое гласит: «Дата доставки близка, поэтому, пожалуйста, не заменяйте эту клетку», таким образом устранение лишнего волнения от замены сепараторов и т. д.
5. В течение одной недели после родов клетки не заменяются, пока мать кормит своих детенышей.
6. Через четыре недели после родов детенышей мышей отнимают от груди.
   Затем мышей-самцов и самок делят на отдельные клетки.
   Чтобы обеспечить достаточное пространство для каждого животного, мышей делят так, чтобы не более 5 мышей в клетке.
7. Через 8 недель после рождения мышей можно спаривать для получения потомства.
   

Эффективная технология разведения

В Центре животных мы внедрили эффективную технологию разведения мышей с использованием экстракорпорального оплодотворения вместо естественного спаривания. С помощью этой технологии можно вывести большое количество детенышей, оплодотворить около 100 яиц от одной самки.

　Заинтересованным лицам следует связаться с персоналом системы Mouse Bank.

Осторожно

Обращение с генетически модифицированными организмами строго регламентировано законом. По этой причине, если что-то произойдет, например, если генетически модифицированные животные сбегут из учреждения, учреждения и исследователи будут наказаны по закону.
　Даже в комнате для размножения, пожалуйста, сообщите персоналу учреждения, если мышь сбежала из клетки. У нас есть специальные инструменты для отлова мышей, и мы будем сотрудничать, чтобы обеспечить возвращение животных в их клетки.

　cardadmikumamoto-u.ac.jp
　->Список контактов (только для внутреннего использования в университете)

НОВОСТИ

• Открыт новый веб-сайт.
  2016.03.31

ПОДДЕРЖКА

Эксперименты на животных в Университете Кумамото

• Процедуры
• Цены
• Правила
• Совет

Создание генетически модифицированных мышей

Микробиологический контроль качества

Банк мышей

ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ

О нашей деятельности

• Назначение
• Детали
• Отчеты

Управление животными

Мемориальные службы животных

ИСТОРИЯ ОБЩЕСТВА ЖИВЕТОВ

Организационная диаграмма

Карта

Здания Животного учреждения

Экспериментальные комитеты животных

Центр генов

Японская ассоциация для лабораторных животных

Японский лабораторный животноводческий комплекс национальных университетских корпораций

Центральный институт экспериментальных животных

Университет Кумамото
Институт разработки и анализа ресурсов
Центр ресурсов и развития животных

〒860-0811
2-2-1 Хондзё, Тюо-ку, Кумамото-ши

Разведение мышей | Обучение и образование

Введение
Предложения по разведению
Разведение химер клеточных мышей ES
Спасение штаммов мышей
Ведение записей
Схемы передачи
Статистика естественного движения населения
Источники дополнительной информации
Руководство NIH по уходу и использованию лабораторных животных

Введение

Мы надеемся, что эта информация будет полезна исследователям, которые не знакомы с разведением мышей или занимаются разведением трансгенных мышей или мышей, нацеленных на гены, для первый раз. Эти рекомендации основаны на нашем опыте. Они открыты для модификации и не должны рассматриваться как всеобъемлющий набор правил.

Рекомендации по разведению мышей

1. Ведите точные записи о разведении. Создайте родословную для каждой трансгенной химеры-основателя или эмбриональной стволовой клетки мыши.

2. Спаривайте мышей, когда они становятся половозрелыми (в возрасте от 6 до 8 недель). Мы рекомендуем скрещивать трансгенных основателей или химер с мышами C57BL/6. После 6 поколений спаривания с C57BL/6 более 99% генетического фона будет C57BL/6. Анализируя экспрессию генов на фоне C57BL/6, можно контролировать любое влияние генетического фона на экспрессию генов по сравнению с нормальными мышами C57BL/6. Кроме того, химеры могут быть скрещены со 129Мыши /Sv+Tyr-c+p, имеющие тот же генотип, что и эмбриональные стволовые клетки. Это позволит получить мышей с мутацией целевого гена на фоне 129/Sv+Tyr-c+p для сравнения с мутацией на фоне C57BL/6.

3. Ожидайте помета в течение месяца после спаривания, так как у самок мышей течка наступает каждые 3 или 4 дня, а время беременности мышей составляет 19-21 день. Если через месяц помет не будет получен, вам следует заменить мышей, которых вы скрещиваете, с вашим родоначальником. Возможно, что трансгенный основатель может быть бесплодным из-за последствий экспрессии трансгена или по неизвестным причинам. Возможно, что фенотипически мужские химеры могут быть бесплодными, поскольку они являются результатом колонизации женского эмбриона мужскими эмбриональными стволовыми клетками.

4. Причины использования мышей C57BL/6.

a) C57BL/6 — стандартный инбредный штамм, обычно используемый в трансгенной селекции
b) спаривание 6-8-недельных мышей для наилучшей репродуктивной способности
i. заменить самцов, когда им исполнится 1 год
ii. заменить самок после 6 пометов или когда им исполнится 6 месяцев
c) скрестить самца-основателя с 2 самками, чтобы получить 2 помета в тесной последовательности
d) скрестить самку-основателя с 1 самцом
e) мыши обычно снова спариваются в день самка рожает, в результате чего появляется второй помет 3 недели
после первого.
f) для быстрого производства животных меняйте 2 самок через клетку самца каждые 1-2 недели
g) размещайте беременных самок по 1 или 2 в клетке, чтобы избежать переполненности клеток

5. Общие проблемы и решения:

a) самка может не заботится о первом помете
добавить проверенную самку-производителя в клетку в качестве помощника и попробовать еще раз
б) самка не заботится ни о каком помете
чаще всего встречается с 129 самками, содержащимися на подстилке, что исключает строительство
сложных «подземных» гнезд
129 клетки для спаривания должны всегда содержать гнездовой материал
b) самец может поедать помет
удалить самца из клетки для спаривания до того, как самка родит
c) бойцовские мыши
i. разделите бойцовских мышей, при необходимости поместите их по одной в клетку
ii. самки обычно не дерутся
iii. самцы могут драться при следующих обстоятельствах: самец
помещается в клетку, содержащую других самцов; самец
отделяется при отъеме, а затем воссоединяется с однопометниками; самец
отлучается от груди в клетку, содержащую самцов из другого помета
самцы агрессивны и могут начать драться без видимой причины
взрослый самец нападает на неполовозрелую самку, когда самку помещают в клетку самца

6. График маркировки ушей, биопсии хвоста, отъема и спаривания:

а) запись рождений на карточка клетки и родословная
b) пометить щенков ушной биркой, когда им исполнится две недели
c) получить биопсию хвоста, когда вы наденете ушные бирки
d) выделить ДНК хвоста и определить генотипы до того, как щенкам исполнится 21 день
e) записать генотипы в родословной
f) отъем щенков в возрасте 21 дня
i. отобрать щенков от их матерей
ii. отказаться от ненужных нетрансгенных щенков
iii. выращивать самцов и самок отдельно
f) когда мышам исполняется 6 недель, их можно спаривать (см. 1. выше)

Вернуться к началу

Разведение химер ES Cell-Mouse

Основываясь на нашем опыте, мы предлагаем следующие рекомендации для разведение химер. Если у вас есть 10 или около того химер для разведения, тогда применяются эти рекомендации. Если у вас есть только одно или два животных, то размножайте их бесконечно, пока вы не сможете производить дополнительных животных из независимых клонов ES-клеток. Возможно, вам повезет, и вы получите передачу по зародышевой линии с низкой эффективностью (определяется как 1 щенок агути на 200 рожденных щенков). Мы рекомендуем вам скрещивать своих химер с партнерами C57BL/6. Щенки, полученные из спермы, полученной из ES-клеток, будут иметь окраску агути, половина этих животных должна нести целевой ген. Щенки, полученные из спермы, полученной от эмбриона-хозяина C57BL/6, будут иметь черную шерсть.

1. Откажитесь от женских химер, если у вас нет химер женского пола с высоким вкладом и искаженного соотношения полов в пользу самок (много химер женского пола и мало химер мужского пола). Вероятно, вы вводили клеточную линию X:O. Самки вполне могут давать передачу по зародышевой линии.

2. Разводите как можно больше самцов, мы наблюдали передачу по зародышевой линии от самцов с небольшим количеством меха агути.

3. Агрессивно размножаются самцы с самого начала ? меняйте 2 самок через клетку самца каждые две недели. Для этого потребуется 3 клетки по 2 самки в дополнение к клетке для размножения самца. Не сажайте химеру-самца в клетку, занятую самками, они могут напасть на него.

5. Если химеры не производят детенышей через 8 недель размножения и чередования самок, они бесплодны и должны быть выброшены. Если самцы производят 6 или более пометов без передачи, то они вряд ли перейдут в зародышевую линию и должны быть выброшены.

Ведение учета:

1. Создайте Родословную для каждого животного-основателя или потомства, которое скрещивалось.

2. Напечатайте индивидуальные карточки клеток для клеток для осеменения и отъема. Карточки клеток для спаривания должны давать мгновенную сводку активности в клетке и служить постоянными записями. Карта отъема позволяет быстро определить местонахождение мышей по линии и ушной бирке.

3. Используйте специальный лист журнала для записи номера ушной бирки, пола, цвета шерсти, номера журнала ДНК хвоста и генотипа для каждой помеченной и хвостатой мыши. Ведите журналы с родословной.

4. Вместе родословная, карты спаривания и журналы должны содержать следующую информацию для каждой мыши: дату рождения, пол, номер ушной бирки, цвет шерсти, номер журнала ДНК, номер клетки для спаривания, номера ушных бирок матери и мыши. отец, источник матери и отца, генотип, дата спаривания, дата эвтаназии, причина эвтаназии (например, анализ тканей), поколение (сколько раз линия была скрещена с C57BL/6).

Вернуться к началу

Периодически мы получаем запросы на помощь в спасении штаммов мышей, которые больше не размножаются. Часто мыши старше репродуктивного возраста. Вот некоторые из подходов, которые можно использовать для «спасения» старых штаммов.

1. Используйте мышей C57BL/6 F1 для установки новых клеток для размножения (см. рекомендации по разведению мышей выше). Большинство гибридов C57BL/6 F1 обладают хорошей репродуктивной способностью. Мы предпочитаем животных (C57BL/6J X DBA/2J)F1. Можно использовать аутбредных мышей CD-1 и ICR, но они привносят в линию больше генетической сложности.

2. Следите за размножающимися самками в поисках пробок для совокупления. Самки вступают в течку каждые 3 дня или около того. Свяжите животных в понедельник и следуйте за ними за вилками. Если они не подключились к пятнице, продолжайте следить за ними в выходные, пока они не подключится или не разорвутся, а затем снова не спарятся в понедельник. Кроме того, Transgenic Core может скрещивать самок мышей F1 с суперовуляцией с вашими самцами в процедуре повторной деривации. У самок собирают икру и под микроскопом определяют оплодотворение. Оплодотворенные яйца передаются ложнобеременным самкам для получения детенышей. Если самец не производит оплодотворенных яйцеклеток (нет пробок или пробок без оплодотворения, то следующим шагом будет экстракорпоральное оплодотворение (см. № 3) 9.0003

3. Если самки F1 прикрепляются, но не беременеют, то самцы, которых вы используете для спасения линии, по определению являются субфертильными. Мы можем использовать эвтаназию самцов, собирать сперму и проводить процедуру экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Transgenic Core регулярно делает ЭКО с отличными результатами. Однажды мы спасли линию от последнего самца, хотя он умер за два дня до ЭКО. При этом мертвый самец хранился в герметичном полиэтиленовом пакете (во избежание высыхания) в холодильнике до проведения ЭКО. В другой раз мы спасли линию мышей от одного спонтанного мутанта-самца с эктопическими каудальными конечностями на месте полового члена (мутация полиподии – ген Ppd на Х-хромосоме).

4. Если самцы F1 не затыкают самок, то самки, скорее всего, ановуляторные. В этом случае вы можете отправить старых самок в лабораторию Джексона для трансплантации яичников самке с ослабленным иммунитетом (для предотвращения отторжения трансплантата), и таким образом вы сможете восстановить линию. Transgenic Core не предлагает эту услугу.

5. Если вы приняли меры предосторожности и криоконсервировали леску в виде замороженных яиц, Core может разморозить яйца и восстановить леску. Если сперма была криоконсервирована, мы можем или не можем восстановить линию с помощью ЭКО или ИКСИ, в зависимости от генетического фона спермы. Мы рекомендуем проверять замороженную сперму на успешность ЭКО до прекращения производства линии.

6. Если линия была получена из клона ЭС клеток, ее можно повторно ввести для получения нового набора химер зародышевой линии.

7. Если линия доступна из другой лаборатории, вы можете импортировать их.

Back to Top

Трансгенная передача:

Три трансгенных (Tg) схемы передачи встречаются у трансгенных животных-основателей. Большинство животных-основателей передают свой ТГ 50% своего потомства. Примерно от 10% до 20% основателей являются мозаичными для Tg из-за поздней интеграции Tg во время эмбриогенеза. Разная доля учредителей (от 5% до 30%) имеет более одного сайта интеграции Tg. Передача 30% или менее потомству является признаком того, что зародышевые клетки основателя являются мозаичными для Tg. В этих случаях целесообразно проверять трансгенный статус основателя и максимально эффективно разводить мышь. Основатели с более чем одной интеграцией Tg могут передать Tg 80% или более своим потомкам. Различные сайты вставки обычно разделяются независимо друг от друга. Саузерн-блот-анализ этих потомков используется для группирования мышей в соответствии с сайтом вставки. Это упрощает анализ экспрессии трансгена, поскольку паттерны экспрессии, связанные с каждой независимой вставкой, изолированы друг от друга. Потомство трансгенных основателей передает Tg как нормальный менделевский ген, независимо от того, был ли основатель мозаичным или мультиинтегрантным.

Направленные на гены схемы передачи:

В химерах эмбриональных стволовых (ES) клеток-мыши встречаются две схемы передачи. Либо передают, либо нет. Коэффициенты передачи, которые мы наблюдали, варьируются от 100% до 0,5%. Также могут возникнуть бесплодные мужские химеры. Поскольку клетки ES представляют собой XY, следует разводить только мужские химеры. Мы рекомендуем вам провести самца химеры через шесть пометов, прежде чем вы решите отказаться от него. Если у химеры высокий коэффициент передачи, вам следует подумать о спаривании ее непосредственно с самками из 129штамм мыши, который соответствует происхождению линии клеток ES, чтобы получить целевую мутацию гена на инбредном фоне.

Гемизиготы или гомозиготы?

Мы рекомендуем поддерживать трансгенные линии как гемизиготы. Основным недостатком сохранения линий в виде гемизигот является то, что все потомство необходимо генотипировать, чтобы определить, какие из них являются трансгенными. Создание гомозиготных трансгенных линий является дорогостоящим и требует дополнительной селекции для получения первых гомозигот. Для обеспечения гомозиготности необходимо дополнительное тестовое разведение. Дополнительное время требуется для установления гомозиготной линии от основателя мозаики с ограниченной передачей трансгена. Дополнительное скрещивание будет необходимо для установления гомозиготных линий для каждого сайта интеграции у основателей с множественными интеграциями. Если это не будет сделано осторожно, в результате появятся животные с комбинациями разных сайтов интеграции. Это усложнит интерпретацию экспериментальных результатов, поскольку разные сайты интеграции могут иметь разные паттерны экспрессии трансгенов. Около 5% событий интеграции трансгена прерывают эндогенный ген, важный для нормального развития (Meisler MH. 19).92. Тенденции Жене. 8:341). У больных мышей может проявляться фенотип, не связанный с трансгеном, что может скрывать эффекты экспрессии трансгена. Неравный кроссинговер между массивами трансгенов у гомозигот может привести к реаранжировке трансгена, которая повлияет на экспрессию. Этот вид нестабильности реже встречается у гемизигот. Многих других трудностей можно избежать, поддерживая гемизиготные трансгенные линии.

Вернуться к началу

Таблица 1. Некоторые жизненные показатели домовой мыши, Mus Musculus

Геном

число хромосом 40
содержание диплоидной ДНК около 6 пг на клетку
3X109 п.н. на гаплоидный геном

Репродуктивная биология

срок беременности 19 – 21 день
возраст при отъеме 3 недели
возраст наступления половой зрелости 6–8 недель
примерный вес при рождении 1 г
отъем 8–12 г
взрослая особь 30–40 г (самец > самка)
продолжительность жизни в лаборатории 1,5–2,5 года
средний размер помета 6–8
общее количество пометов на
репродуктивная самка 4 – 8
срок размножения самок 6 – 8 месяцев
срок полезного размножения самцов 18 – 24 месяца

§McKusick, V. A. и Ф. Х. Раддл. 1977. Состояние генной карты хромосом человека. Наука 196:390-405.
¥Беннетт, К.Л., Р.Э. Хилл, Д.Ф. Пьетрас, М. Вудворт-Гутай, К. Кейн-Касс, Дж. М. Хьюстон, Дж. К. Хит и Н. Д. Хасти. 1984. Наиболее часто повторяющиеся семейства рассредоточенной ДНК в геноме мыши. Мол. Клетка. биол. 4: 1561-1571.

Вернуться к началу

Источники дополнительной информации

Таблица 1 адаптирована из документа Манипулирование эмбрионом мыши: лабораторное руководство

Отличным источником является второе издание Биология лабораторной мыши , подготовленный сотрудниками лаборатории Джексона, опубликованный Blakiston Division of McGraw-Hill.

Дополнительную информацию о разведении мышей можно найти в:

• Справочник по генетически стандартизированным мышам JAX , 1997 г., подготовленный сотрудниками лаборатории Джексона, доступен в лаборатории Джексона.
• Систематический подход к оценке мутаций мыши . 2000. Сандберг, Дж. П. и Боггесс Д., ред. CRC Press, LLC, Бока-Ратон, Флорида.
• Генетика и трансгеники мышей: практический подход . 2000. Джексон, И.Дж., и Эбботт, К.М., ред. Издательство Оксфордского университета, Нью-Йорк.
• Генетика мышей: концепции и приложения .